利用质控数据进行测量不确定度的评定

检验医学与临床２Ｏ１Ｏ年ｌＯ月第７卷第２Ｏ期　Ｉ　ａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１０，Ｖｏ１．７，Ｎｏ．２０　腹时胰岛素有所增加，但仍较健康人低，可能是由于胰岛口细　胞功能受损所致。作者建议在葡萄糖耐量试验中，最好能联合　检测胰岛素、Ｃ肽的血清含量，以致达到糖尿病分型的目的，同　时了解胰岛８细胞功能，对于糖尿病的治疗和预后有重要的指　导作用。　ｌ９９８：２４　，２４９．　赵枰，陶国华．化学发光免疫分析测定胰岛素及Ｃ　［２］　谢玮，肽在２型糖尿病诊断的临床应用ＥＪ］．标记免疫分析与临　床，２００９，１６（５）：２８３—２８４．　［３］　贾伟平，项坤三．胰岛Ｂ细胞功能评估　从基础到临床　ＥＪ］．中华内分泌杂志，２００５，２１（３）：１９９　２０１．　参考文献　［１］尹伯元，王仁芝．标记免疫学［Ｍ］．北京：原子能出版社，　（收稿日期：２Ｏ１０一Ｏ４—１９）　利用质控数据进行测量不确定度的评定　王景阳，孙　艳，尹艳霞，张瑞青（河北省沧州市中心医院检验科０６１００１）　【摘要】　目的　以荧光定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＨＢＶ＿ＤＮＡ试验为例，探讨利用质控数据进行测量不确　定度评定的可行性。方法　利用室内质控数据和室间质评数据或回收率实验数据，计算相对标准不确定度分量，然　后再按不确定度传播规律计算得到相对合成标准不确定度。结果　浓度愈低的样本显示出更大的相对不确定度，　荧光定量ＰＣＲ检测ＨＢＶ—ＤＮＡ试验在中值（１０　ｕ／ｍＩ　）附近的相对扩展不确定度为Ｕ　一０．１１（　一１．９６）。结论　利用质控数据来评定测量不确定度具有简便、客观和准确的优点，是一个很值得尝试的方法。但是该方法不能具体　区分各不确定度分量权重大小。　【关键词１测量不确定度；　室内质控；　室间质评；　回收实验；　乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—９４５５．２０１０．２０．０５４　中图分类号：Ｒ一３３１；Ｒ４４６．６１　文献标志码：Ｂ　文章编号：１　６７２—９４５５（２０１０）２０—２２６９—０２　作程序及质量控制程序等ＳＯＰ文件，这为测量不确定度的评　定打下了基础，同时提供了便利．。严格执行本室ＳＯＰ文件，每　测量不确定度（ｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙ　ｉｎ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）是经典的误差　理论发展和完善的产物，是对测量结果的补充，表明对这一结　果怀疑的程度。目前，这一概念已成为一般计量学的重要话　次试验均做室内质控样本检测并绘制质控图。收集２００８年５　月至２００８年１０月室内质控数据８６个，取对数后计算。　１．２．２室间质评信息上述由室内质控数据计算不确定度的　过程没有考虑方法偏倚（即系统效应）所致的不确定度分量。　这个不确定度分量可以利用室间质量评价数据计算得到，也可　以在实验室内用回收率实验结果来判断。本院基因扩增实验　室已连续数年参加卫生部临床检验中心组织的室间质量评价　活动，ＨＢＶ－ＤＮＡ室问质量评价信息见表１。　题，其在临床检验领域的重要性也在增加。但是临床检验项目　繁杂，影响因素较多，对各不确定度分量进行逐一评定是十分　困难的。根据ＪＪＦ１Ｏ５９—１９９９｛测量不确定度评定和表示》“由于　数学模型可能不完善，所有有关的量应充分反映其实际情况的　变化，以便可以根据尽可能多的观测数据来评定不确定度。在　可能的情况下，应采用按长期积累的数据建立起来的经验模　型。核查标准和控制图可以表明测量过程是否处于统计控制　状态之中，有助于数学模型的建立和测量不确定度的评定。”据　此，可以利用实验室内的一个长期积累的数据——质量控制数　据来完成不确定度的评定。下面以基因扩增实验室荧光定量　聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ载量试　验为例进行讨论。　１材料与方法　１．２．３回收率实验数据　目前临床实验室有些检验项目没有　参与室间质量评价活动，对此可以利用实验室内部的回收率试　验结果，同样也可以计算得到方法偏倚所致的不确定度分量。　每更换新批号试剂都要做回收率实验，收集２００８年１月至　２００９年１月回收率试验结果９个，计算回收率均值为９２．８　，　因此方法偏倚即为（１００　９２．８）　一７．２　，按均匀分布取包含　１．１试剂与仪器　１．１．１　室内质控品　室内质控样品为广州中山大学达安基因　因子ｋ一√３，则该相对不确定度分量为７．２　／√３＝０．０４２。在　此未考虑加标样品的不确定度分量。　股份有限公司提供的ＨＢＶ分子生物学室内质控物（中值），批　号２００８００５，其稳定性与均一性均达到国家一级标准物质的要　求（一级标准物质技术规范，ＪＪＧ１００６一ｌ９９４）。　１．１．２室问质评所用质控物ＨＢＶ—ＤＮＡ质控品，每年由卫　１．２．４相对合成标准不确定度及相对扩展不确定度的确定　根据不确定度传播律，相对合成标准不确定度ｕ　一　￣（Ｕｔｅｌ（ｑ））　＋（“　一））　一相对扩展不确定度：Ｕ　—Ｋｕ　（取　所有数据采用ＳＰＳＳ１５．０统计软件进行处　生部临床检验中心统一发放。　１．９６，此时对应的置信概率约为９５　）。　１．１．３试剂ＨＢＶ—ＤＮＡ荧光定量ＰＣＲ试剂盒为广州中山　１．３统计学方法大学达安基因股份有限公司产品。　理。ＨＢＶ—ＤＮＡ检测结果取对数后进行统计学分析。　２　结　果　１．１．４　仪器　美国应用生物系统公司所产ＡＢＩ　ＰＲＩＳ—　ＭＡ７０００型荧光定量ＰＣＲ仪。　１．２实验方法　室内质控数为８６次，均值（ｊ）一５．２１，标准偏差（Ｓ）一　０．１４，据计算得到的相对标准不确定度为Ｕ　一ｓ　一０．０２７。　，一　根据如下公式可以计算出方法偏倚的变异：Ｃ　１．２．１　室内质控数据通过卫生部临床检验中心评审验收的　基因扩增实验室，规范和完善了实验室标本拒收程序、ＰＣＲ操　￣／（　％／２）　＋　一￣／（５．４７／２）。＋４．００　一４．８５　，即方法偏　倚的相对标准不确定度Ｕ　）一Ｃ　）一０．０４８　５。在此，仅　・　２２７Ｏ　・　检验医学与临床２０１０年１Ｏ月第７卷第２Ｏ期Ｌａｂ　Ｍｅｄ　Ｃｌｉｎ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１０，Ｖｏ１．７，Ｎｏ．２０　加　加　加　对中值（１０　Ｕ／ｍＬ）附近质评数据进行了统计计算得出方法偏　∞　∞　荧光定量ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ试验（中值附近）的相对　倚的相对不确定度分量。同样也可以计算出低值（１Ｏ。～１Ｏ　合成标准不确定度：Ｍ　一￣／（“　。））　＋（“　‰））。一　Ｕ／ｍＬ）附近的方法偏倚相对不确定度分量为０．０７０，高值（１０　Ｖ０．０２７。＋０．０４８　一０．０５５。相对扩展不确定度：　ｚ—Ｋ“一　～１０　Ｕ／ｍＬ）附近的方法偏倚相对不确定度分量为０．０３２。这　一１．９６。该相对扩展不确定度可用于患者检验结果报告，如ｚ　与沈伟锋等ｌ＿２　的研究结果有异，而与余南等¨３　的研究结论一　为检验结果的对数值，那么患者ＨＢＶ—ＤＮＡ检测结果表示为：　致，即愈低浓度的样本显示出更大的相对不确定度。提示室内　１Ｏ　（　±。”’Ｕ／ｍＬ（ｋ一１．９６）。　质控宜应分别做高、中、低值质控。　表１　ＨＢＶ—ＤＮＡ室间质量评价信息　时间（年）　室间质评次数　实验室结果（取对数）　靶值　百分差值ｄ　％ｄ　％一ｄ　％　（　％一ｄ　％）　５．１２　６．２５　０．７８　０．６１　５　５　５　５　４　５　５．３　５．２８　０．１９　０．０４　鼹　娼　％　１　４．９４　１２．９６　７．４９　５６．１０　４．９４　２．８３　２．６４　６．９７　４．９２　０．８１　４．６６　２１．７１　４．９２　４．６７　Ｏ．８Ｏ　０．６４　和　３２．８１　８６．０７　平均（　％）　５．４７　３讨　论　标样更合适。一般标准品基质都有所改变，比通常的检测样品　临床实验室更多检测项目测定程序复杂，影响因素较多，　更均匀，用于不确定度评定时可能无法反映出样本不均匀所致　且各因素相互影响或包容，很难界定各个不确定度分量。按照　的不确定度分量。而单独评定样本不均匀性的不确定度分量　常规的不确定度评定方法对各不确定度分量进行逐一评定较　是很困难的。而实物标样由于是本实验室内自己制作的，对基　难实现，而且需要做大量的批内、批间重复性实验，不宜临床实　质、含量水平、均匀性等方面都可以自己控制，可以部分反映样　验室推广。其实，完全可以利用实验室已有的质控数据，计算　本不均匀性导致的不确定度分量，但需要一个制作过程，且质　得到不确定度。利用半年或更长时间跨度的室内质控数据和　控样品赋值的不确定度未知ｌ３］。　室间质量评价信息计算的不确定变，几乎涵括了检测的各个环　从本研究可以看出，不确定度大小和待测样品浓度相关，　节的不确定度分量，如标准品所致的不确定度分量、标准曲线　愈低浓度的样本显示出更大的相对不确定度。因此，不确定度　拟合所致的不确定度分量、数据处理带来的不确定度分量、实　的计算宜应根据待测样品浓度分高、中、低３个区段分别计算。　验人员所致的不确定度分量等。但是如果采用的质控样品是　总之，利用质控数据来评定测量不确定度是一个很值得尝　直接应用未经稀释的，那么由样品稀释所导致的不确定度则不　试的方法。质控过程是每个临床实验室都必须做的，产生的大　包括在内，这可由计量局对用于稀释的移液器的校准报告获　量数据可以直接利用，而不需要单独开展不确定度评定工作，　得，然后再合成进去，在此不予赘述。测定样本间的不均匀性，　减小了工作量。而且它还具有以下优点：质控数据量大，不确　其确定度较难估计，在样本接收、处理和保存严格标准化的前　定度评定客观、准确；不需要太深的数理统计知识；不确定度的　提下，使分析前因素的影响降至最低（＜１／５最大不确定度分　各个影响量都能包含，遗漏和重复的可能性小。当然，也有一　量），可以不予考虑这些因素［　。另外，如果已知质控样品赋值　些缺点，比如需要一个合适的质控样品、需要一个较长时间的　的不确定度，也应该合成进去。本研究中厂家没有给出质控品　质控数据积累过程、不能具体区分各不确定度分量权重大　赋值的不确定度，因此未予考虑。　小等。　批内重复性和批间重复性数据可以用于不确定度评定　ｊ。　参考文献　重复性数据的获取有着比较明确的规定，即在一个比较短的时　期内重复试验，则重复性数据就可能不包括人员间、日问、月间　［１】王治国，王薇，李小鹏．测量不确定度及其在Ｉ临床检验中　等有关量对测量结果的影响。但是通过长期的数据积累，这些　的应用［Ｊ］．中国卫生统计，２００５，２２（２）：８５—８６．　因素对最终测量结果的影响都能在质控数据中得以体现，所以　［２］沈伟峰，丁韧烨，杨清萍，等．荧光定量ＰＣＲ测定ＨＢＶ－　由质控数据得到的不确定度更为准确、客观，而且无需做大量　ＤＮＡ的不确定度评定与应用［Ｊ］．中华检验医学杂志，　的重复性试验。　２００７，３０（２）：１６９—１７２．　值得注意的是，利用质控数据和回收率试验数据进行不确　［３］余南，甘明，詹希美，等．乙型肝炎病毒核酸定量检测中不　定度的评定时，一个合适的质控样品是必需的。其基质、含量　确定度的研究［Ｊ］．热带医学杂志，２００７，７（４）：３１０—３１４．　水平、均匀性和稳定性都要满足一定的要求。质控样品也可以　直接使用标准品，但实际上，一个基质与检测样本一致的实物　（收稿日期：２０１０—０５—２４）