猪支原体肺炎疫苗研究进展

２０１３第３期　养猪ＳＷＩＮＥ　ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ　９３　猪支原体肺炎疫苗研究进展　施尧　（南京农业大学动物医学院，江苏南京中图分类号：￥８５８．２８５．１　文献标志码：Ａ　２１００９５）　文章编号：１００２—１９５７（２０１３）０３—００９３—０３　摘要：猪支原体肺炎是严重影响世界养猪业的疾病之一，也是造成猪呼吸道病综合征的主要疾　病之一。猪支原体肺炎的商品化疫苗有灭活疫苗和弱毒活疫苗。灭活疫苗主要激发机体的体液免　疫，对外周免疫细胞的影响不大。活疫苗能够激发细胞免疫和黏膜免疫，通过占位效应很好地减少　支原体肺炎的发生，但活疫苗肺内注射的免疫途径限制其大面积推广，辅以保护性佐剂可经肌肉　注射达到很好的免疫效果。新型疫苗如亚单位疫苗和口服微球疫苗已经研制成功，但其商品化仍　需一个过程。　关键词：猪支原体肺炎；灭活疫苗；弱毒活疫苗；亚单位疫苗　猪支原体肺炎（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｌ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ　ｏｆ　ｓｗｉｎｅ．　养、滴定，如颜色变化单位ＣＣＵ达１０９ｍＬ以上，用　ＭＰＳ）又称猪喘气病，是由猪肺炎支原体（Ｍｙｃｏｐｌａｓ—　甲醛灭活后，加入自主研发的免疫佐剂一６０３制成　ｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，Ｍ．ｈｙｏ）引起的一种慢性呼吸道　疫苗，免疫猪在６个月内能检测到保护性抗体，攻毒　传染病。临床上以咳嗽、气喘和肺部典型的“虾肉”　试验证明灭活疫苗免疫猪能有效获得攻毒保护［９１。但　样病变为特征，发病率高，死亡率低。猪肺炎支原　体常与其他细菌和病毒混合感染，引起猪地方性　肺炎（Ｅｎｚｏｏｔｉｃ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ，ＥＰ）和猪呼吸道病综合征　（Ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｃｏｍｐｌｅｘ．ＰＲＤＣ）ｆ　Ｊ。猪肺　炎支原体常通过病猪与健康猪接触或通过飞沫经　空气传播翻，其传播距离一般可达４．７　ｋｍ［３￣，最远可　达９．２　ｋｍ　。猪肺炎支原体对一些消毒剂及一些恶　劣环境如干燥具有抵抗力［５１，一旦传入很难彻底扑　灭。单纯的药物防控猪支原体肺炎有效，但存在保　护期短，必须长期间隔或定时给药，成本高，易产生　耐药性的缺点嘲，因此，采用疫苗防控猪支原体肺炎　是重要选项。目前用于预防猪肺炎支原体感染的商　品化疫苗有灭活疫苗和弱毒疫苗。　１猪支原体肺炎灭活疫苗　自２０世纪９Ｏ年代猪支原体肺炎灭活疫苗在　美国注册上市以来，已有大量试验证明免疫猪支原　体肺炎灭活疫苗带来了很大的经济效益问。Ｗｉｌｓｏｎ等　在德国南部的一个肺炎支原体阳性猪场使用富道喘　气病灭活疫苗（Ｓｕｖａｘｖｎ　ＭＨ一０ｎｅ）免疫４～５日龄的　仔猪发现，免疫组的肺部病变率、屠宰重、日增重与　对照组均有显著差异，这说明Ｓｕｖａｘｖｎ　ＭＨ—Ｏｎｅ疫　苗免疫小于７日龄的仔猪，可有效降低猪感染肺炎　支原体对肺部造成的伤害，同时减少体重损失和增　加平均日增重，提高了猪的生长性能罔。潘延钵等对　从美国菌种中心引进的猪肺炎支原体（Ｊ株）进行培　收稿日期：２０１３—０３—２３　作者简介：施尧（１９９２～），男，甘肃山丹人，主要从事猪病研究　Ｅ－ｍａｉｌ：ｖｅｔ．ｓｈｉｙａｏ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｒｎ　是灭活疫苗主要激发机体的体液免疫㈣。Ｋｉｃｋ等发　现，未免疫猪支原体肺炎灭活疫苗的对照组血液　ＣＤ４ｑ＇细胞的百分数要小于免疫组，然而对照组　ＣＤ８１．细胞及ＣＤ４ｑＣＤ８ＣＦ细胞却多于免疫组，这可　能与试验过程中经历了断奶有关，但也间接说明了　灭活疫苗对外周免疫细胞的影响不大［１ｌ１。　２猪支原体肺炎弱毒活疫苗　２．１免疫效果和安全性　刘茂军等使用猪支原体肺炎活疫苗（１６８株）在　河南３个猪场进行临床免疫效力试验，研究结果显　示，免疫猪的肺病变与非免疫组之间都存在显著差　异，疫苗免疫显著降低了试验猪的肺病变，这表明猪　支原体肺炎活疫苗（１６８株）具有良好的免疫保护性【－　。　此外，Ｅｌｓｂｅｍｄ等发现，免疫过猪支原体肺炎活疫苗　的猪群比未免疫猪群日增重平均增加１７．９１　ｇ，最高　达２９．６３　ｇ，这表明免疫活疫苗对仔猪生长有促进作　用【　３１。与猪瘟疫苗同时免疫也有很好的免疫效果，沈　青春等对２４头３０～４０日龄仔猪分别或同时免疫猪　支原体肺炎活疫苗（ＲＭ４８株）和猪瘟活疫苗（传代　细胞源），结果表明，两种疫苗同时免疫对各自的近　期免疫效力均无明显影响㈣。　猪支原体肺炎活疫苗（１６８株）免疫后，免疫猪　和同群感染猪均未观察到典型的临床症状和病理　变化；连续５代返强试验，试验猪均未观察到典型的　临床症状和病理变化，说明该疫苗株未出现返强。　单剂量、单剂量重复和大剂量试验及５批次疫苗的　临床试验也未观察到不良反应【－　，这说明受试批次　猪支原体肺炎活疫苗（１６８株）具有良好的安全性。　养猪ＳＷＩＮＥ　ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ（３）　２．２免疫机理　２０１３　Ｍ．ｈｙｏ１６８株的基因组为模板，经扩增、转化大肠杆　猪支　仆肺炎疫苗的免疫机理独特，黏膜免疫　菌表达、突变、菌株破碎、蛋白纯化，纯化后加入佐剂　和【Ｉ　Ｊ‘他效　免疫过程巾发挥重要作用　。仔猪出　制成疫苗，经动物免疫后发现，以Ｐ３６、Ｐ４６、Ｐ６５蛋　，｝　后５～７　ｃ１，／１　会自然感染肺炎支原体，活疫苗弱毒　白为组分和以Ｐ３６、Ｐ４６、Ｐ６５、重组质粒Ｐ９７Ｒ１一Ｎｒｄｆ　株通过肺内注射直接到达肺泡黏膜表面，在肺泡表　蛋白为组分的猪支原体肺炎亚单位疫苗均能产生较　面形成优势占位，借助黏膜蛋白等营养物质大量繁　殖，最终占据肺泡表面所有的可占用空间（大约需　１　２周时间），同时，这个过程伴随机体发生局部黏　膜免疫、细胞免疫和体液免疫。此时，如果仔猪吸入　感染肺炎支原体野毒株，肺泡表面已缺乏可占据的　高水平的抗体，且产生了比常规猪支原体肺炎疫苗　免疫组更高水平的ＩＦＮ一＾ｙ（　干扰素），而ＩＦＮ一　是　由Ｔ细胞分泌的，是介导细胞免疫的关键，在活化　巨噬细胞抵抗猪肺炎支原体的过程中发挥着一定的　作用。此外，注射２种亚单位疫苗小鼠的脾脏Ｔ淋　空位，野毒被抗体中和、淋巴细胞吞噬或衰竭死亡，　从而减少喘气病的发生㈣。　２．３佐剂和免疫途径对免疫效果的影响　猪支原体肺炎弱毒活疫苗显示出良好的免疫　效果，但由于现有活疫苗采用肺内注射的免疫途径，　一定程度上影响了其广泛应用。活疫苗辅以佐剂肌　肉注射显示出良好的免疫效果。熊祺琰等发现，免　疫刺激复合物（ＩＳＣＯＭ）基质佐剂和左旋咪唑＋壳聚　糖混合佐剂肌肉注射能有效激发细胞免疫应答和体　液免疫应答；同时左旋咪唑＋黄芪多糖混合佐剂能　增强疫苗的细胞免疫刺激能力，而对体液免疫无作　用；但是皂角素佐剂未显示明显的免疫增强效果［　８１。对　ＩＳＣＯＭ一基质的研究发现，ＩＳＣＯＭ一基质不影响活疫　苗的活力，并且在体外可直接或协同刀豆蛋白刺激　淋巴细胞产生明显的增殖反应，最低起效浓度为　０．０１　ｎｇ／ｍＬ；当作为佐剂与活疫苗配合肌肉注射免　疫时，可显著诱导动物对疫苗抗原的细胞免疫应答，　体液免疫应答亦有一定程度增强。用肺炎支原体强　毒攻毒后２５　ｄ剖检，免疫组病变明显较对照组减　轻，显示出较好的攻毒保护效果㈣。赵卓等发现，用　６０３５纳米佐剂稀释猪支原体肺炎冻干活疫苗，肌肉　注射，采用“５５分计分法”记录肺脏病变情况，结果　表明，疫苗经纳米佐剂稀释后，与用生理盐水稀释的　疫苗相比，肺炎减少率均达到８０％以上，且胸腔免　疫与肌肉注射效果相当　。　黏膜免疫在猪支原体肺炎免疫应答中发挥重　要作用，因此，探究能引起良好免疫应答的口服或喷　雾佐剂成为支原体肺炎疫苗研究的热点。Ｌｉｎ等发　现，通过共同喷雾干燥法制作的口服微球疫苗能为　猪提供有效的保护力『２ｌ＿。而经喷雾免疫时，喷雾器在　雾化过程中的切割力能显著降低疫苗的活力。喷雾　器喷射压力越大，对疫苗活力下降的影响越大【笠】。　３新型亚单位疫苗的研制　Ｆａｇａｎ等以肺炎支原体核糖核酸氧化酶Ｎｒｄｆ和　Ｂ一半乳糖苷酶Ｒ２亚单位的融合蛋白为基础构建新　型亚单位疫苗，免疫此疫苗后用强毒株攻毒，免疫组　比未免疫组猪肺的损伤率显著降低　。马丰英等以　巴细胞诱导的ＩＬ一４（白细胞介素４）极显著高于对照　组（Ｐ＜０．０１），说明这２种亚单位疫苗在激活体液免　疫的同时也激活了细胞免疫［２４１。　４小结与展望　猪支原体肺炎是影响世界生猪养殖业的重要传　染病之一，目前防控猪支原体肺炎的商品化疫苗有　灭活疫苗和弱毒活疫苗。灭活疫苗只激发机体的体　液免疫，而抗原的制备工艺是灭活疫苗生产的瓶颈，　其高滴度和高纯度抗原生产工艺仍是国际支原体组　织（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｐｒｏｇｒａｍｍｅ　ｏｎ　Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　Ｍｙｃｏｐｌａｓｍｏｌｏｇｙ．ＩＲＰＣＭ）在２０１２年大会上的５项主　要议题之一。对肺炎支原体而言，疫苗诱导产生的　抗体水平和阻止病原移行及疾病的发生联系不大，　疫苗抗体水平不一定与保护正相关，只为参考性指　标。弱毒疫苗能够激发机体的细胞免疫，通过占位　效应而减少喘气病的发生，免疫效果良好。但弱毒　疫苗肺内注射的免疫方法阻碍着其推广。活疫苗辅　以多种佐剂经肌肉注射能达到良好的免疫效果，因　此，探究新型佐剂、改良活疫苗的免疫方法，使活疫　苗能够通过肌肉注射、口服或者喷雾免疫是今后猪　支原体肺炎疫苗研究的关键。　新型疫苗能够很好地激发机体细胞免疫，然而　以天然菌体成分或其分泌物作为亚单位疫苗的组　分，其免疫原性虽好，但提取成本高、产量较低，因　此，利用基因工程方法制各亚单位疫苗是首选途径。　新型疫苗的商品化也是今后支原体防控的关键。　参考文献：　［１］１　Ｗｏｅｓｔｅ　Ｋ，Ｇｒｏｓｓｅ　Ｂ　Ｅ．Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａｇｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｃｏｍｐｌｅｘ（ＰＲＤＣ）ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｗｉｎｅ　ｈｅｒｄｓ：ａ　ｒｅ—　ｖｉｅｗ　Ｐａｒｔ　Ｉ－ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｖｉａ　ｐｉｇ　ｍｏｖｅｍｅｎｔ　ＩＪ］．Ｄｔｓｃｈ　Ｔｉｅｒａｒｚｔｌ　Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ，２００７，１　１４（９）：３２４—３２６，３２８－３３７．　【２】　Ｃａｒｄｏｎａ　Ａ　Ｃ，Ｐｉｊｏａｎ　Ｃ，Ｄｅｅ　Ｓ　Ａ．Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ　Ｍｙｅｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐ—　ｎｅｕｌｎｏｎｉａｅ　ａｅｒｏｓｏｌ　ｍｏｖｅｍｅｎｔ　ａｔ　ｓｅｖｅｒａｌ　ｄｉｓｔａｎｃｅｓ　ｆＪ］．Ｖｅｔ　Ｒｅｃ，　２００５，１５６（３）：９１－９２．　［３】Ｄｅｅ　Ｓ，Ｏｔａｋｅ　Ｓ，Ｏｌｉｖｅｉｒａ　Ｓ，ｅｔ　ｏ１．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｏｆ　ｌｏｎｇ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ａｉｒ＿　ｂｏｍｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎ—　ｄｒｏｍｅ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｄ　Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ［Ｊ］．Ｖｅｔ　Ｒｅｓ，２００９，　４０（４）：３９．　【４１　Ｏｔａｋｅ　Ｓ，Ｄｅｅ　Ｓ，Ｃｏ＝ｏ　Ｃ，ｅｔ　．Ｌｏｎｇ－ｄｉｓｔａｎｃｅ　ａｉｒｂｏｒｎｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｏｆ　２０１３第３期　养猪ＳＷＩＮＥ　ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ　９５　急性副猪嗜血杆菌病的　－：公　厶　Ｉ１＝１　与分析　朱秀高　（武汉回盛生物科技有限公司，湖北武汉中图分类号：￥８５８．２８５．１　文献标志码：Ｂ　４３００４２）　文章编号：１００２—１９５７（２０１３）０３—００９５—０２　限在肺脏、心脏及跗关节，表现为心包严重积水（图１）、　１发病情况　２０１３年３月，江苏某地区一存栏５７０头母猪猪　呈浅黄色（４／４），肺脏肿胀（图２）、表面有点状坏死灶　３／４），关节腔内有大量淡黄色积液（４／４）。　场的保育猪群发病，临床表现为突然不食、高热至　（４０　ｃＩ＝、有轻微呼吸急促症状、呈腹式呼吸；两天后病　猪瘫痪在保育床上，并在４８小时内死亡；截至笔者　现场处理时，全群发病率为４８％、死亡率６５％，无其　他明显可见临床表现。发病后先后用阿莫西林（含　克拉维酸钾）及头孢噻呋钠预混剂经饲料给药治疗　无明显效果。　图１心包积水　图２肺脏肿胀　将４头发病瘫痪猪宰杀后解剖，观察其内脏器　官的病理变化，其中肝脏、肾脏、脾脏及淋巴结等部　２诊疗情况　位无任何异常，胃肠等消化器官也无病变。病变局　根据发病情况、临床症状和剖检病变，笔者怀疑　病猪为急性副猪嗜血杆菌感染，在采取治疗措施的　收稿日期：２０１３—０４—１８　同时进行实验室诊断。病猪宰杀后无菌条件下采集　作者简介：朱秀高（１９８４－），男，山东潍坊人，执业兽医师，硕士，主要　心包液和关节液划线于自制的含ＮＡＤ（烟酰胺腺嘌　从事动物疾病防治工作．Ｅ—ｍａｉｈｚｈｕｘｉｕｇａａｏ＠１６３．ｅｏｍ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ＰＲＲＳＶ　ａｎｄ　Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　ｆｒｏｍ　ａ　ｓｗｉｎｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｖｉｒａｌ　ｖａｒｉａｎｔｓ　ｍ．Ｖｅｔ—　ｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１０，１４５（３—４）：１９８—２０８．　ｆ５１　Ｅｔｅｒｐｉ　Ｍ，ＭｃＤｏｎｎｅｌｌ　Ｇ，Ｔｈｏｍａｓ　Ｖ．Ｄｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｅｆｉｃａｃｙ　ａ—　ｆｇａｉｎｓｔ　Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ［Ｊ］．Ｌｅｔｔ　Ａｐｐｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ，２０１　１，５２（２）：１５０—１５５．　［６】华利忠，冯志新，刘茂军，等．猪支原体肺炎疫苗的免疫原理　及应用效果概述　．中国兽药杂志，２０１２，４６（８）：５８—６１．　『７１　Ｍａｅｓ　Ｄ，Ｖｅｒｂｅｋｅ　Ｗ。Ｖｉｃｃａ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｂｅｎｅｆｉｔ　ｔｏ　ｃｏｓｔ　ｏｆ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　ｉｎ　ｐｉｇ　ｈｅｒｄｓ　ｕｎｄｅｒ　Ｂｅｌｇｉｎ　ａｍａｒｋｅｔ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　１９９６　ｔｏ　２０００【Ｊ］．Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００５，８３：８５—９３．　『ｌ４１沈青春，范学政，王芳，等．猪瘟和猪肺炎支原体活疫苗同时　免疫的相互干扰研究　中国兽药杂志，２０１１，４５（１２）：９－１２．　『１５１刘茂军，苏国东，周勇岐，等．猪支原体肺炎活疫苗１６８株的　安全性研究Ⅲ．中国兽药杂志，２０１２，４６（７）：１－４．　ｆ１６１王荣祥，杨倩，张小飞，等．气喘病疫苗免疫效果探讨『Ｊ］．畜牧　兽医杂志，２０１１，３０（２）：９１—９５．　『１７１周勇岐，赵永前．猪支原体肺炎１６８株活疫苗的作用机理与　应用ｆＪ］．中国牧业通讯，２００８（１Ｏ）：４９—５２．　ｆ１８１熊祺琰，范志鹏，甘源，等．几种佐剂对肌肉注射猪支原体肺　炎活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究　中国畜牧兽医，　２０１１，３８（１Ｏ）：１６３—１６８．　［８】Ｗｉｌｓｏｎ　Ｓ，Ｂｒｕｓｓｅｌ　Ｌ　Ｖ，Ｓａｕｎｄｅｍ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｉｇｌｅｔｓ　ａｔ　１　ｗｅｅｋ　ｏｆ　ａｇｅ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｒｅｄｕｃｅｓ　ｌｕｎｇ　ｌｅｓｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｉｍｐｒｏｖｅｓ　ａｖｅｒａｇｅ　ｄａｉｌｙ　ｇａｉｎ　ｆ１９】熊祺琰，王占伟，甘源，等．免疫刺激复合物基质为佐剂的猪　支原体肺炎活疫苗肌肉注射免疫效果评价ｆＪ］．江苏农业学　报，２０１ｌ，２７（６）：１３１０—１３１５．　ｉｎ　ｂｏｄｙ　ｗｅｉｇｈｔ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ，２０１２，３０：７６２５—７６２９．　［９］潘延钵，赵卓，张海玲，等．猪支原体肺炎灭活疫苗的免疫效　果研究ｆＪ］．中国兽药杂志，２００９，４３（８）：２２—２４．　ｆ１０１　Ｓｉｂｉｌａ　Ｍ，Ｂｅｒｎａｌ　Ｒ，Ｔｏｒｒｅｎｔｓ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｉｅｅｔ　ｏｆ　ＳＯＷ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ａ—　『２ｏ］赵卓，潘延钵，张海玲，等．６０３５纳米佐剂对猪支原体肺炎活　疫苗免疫效果的影响Ⅲ．中国兽医杂志，２００９，４５（９）：４５—４６．　【２１】Ｌｉｎ　Ｊ　Ｈ，Ｗｅｎｇ　Ｃ　Ｎ，Ｌｉａｏ　Ｃ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｏｒａｌ　Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ　Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　Ｖａｃｃｉｎｅ　Ｐｒｅ—　ｇａｉｎｓｔ　Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　ｏｎ　ＳＯＷ　ａｎｄ　ｐｉｌｅｔ　ｃｏｌｇｏｎｉｚａ—　ｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ，ｎｄ　ｐｉａｇ　ｌｕｎｇ　ｌｅｓｉｏｎｓ　ａｔ　ｓｌａｕｇｈｔｅｒ　ｆＪ］．　ｐａｒｅｄ　ｂｙ　Ｃｏ—Ｓｐｒａｙ　Ｄｒｙｉｎｇ　Ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｊ　Ｖｅｔ　Ｍｅｄ　Ｓｅｉ，２００３，６５（１）：　６９－７４．　［２２］冯志新，李桂兰，邵国青．雾化对猪支原体肺炎活疫苗活力的　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，１２７（１—２）：１６５—１７０．　［１　１】Ｋｉｃｋ　Ａ　Ｒ，Ｔｏｍｐｋｉｎｓ　Ｍ　Ｂ，Ｈａｍｍｅｒ　Ｊ　Ｍ，ｅｔ　．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅ—　影响ＩＪ］．金陵科技学院学报，２００９，２５（２）：７５—７７．　ｉｐｈｅｒａｆｌ　ｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅｓ　ａｆｔｅｒ　ｗｅａｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｍｒ—　［２３】Ｆａｇａｎ　Ｐ　Ｋ，Ｄｊｏｒｄｊｅｖｉｃ　Ｓ　Ｐ，Ｅａｍｅｎｓ　Ｇ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌｒ　ｃｈａｒａｃ—　ａｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｒｅｄｕｃｔａｓｅ　ｆｎｒｄｎ　ｇｅｎｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｍｙｅｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉｏｅ　ａｎｄ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｃｏｐｌｍｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ［Ｊ】．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｉｎ　ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　ｓｃｉｅｎｃｅ，　２０１　１，９１（３）：ｅ６８－７２．　【１２】刘茂军，苗连叶，赵永前，等．猪支原体肺炎活疫苗１６８株临　ｐｒｏｄｕｃｔ　ａｓ　ａｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌａ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｆｏｒ　ｅｎｚｏｏｔｉｃ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ［Ｊ］．　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９９６，６４（３）：１０６０—１０６４．　［１３］Ｅｌｓｂｅｒｎｄ　Ａｄｏｈｎｓｏｎ　Ａ　Ｋ，Ｓｔａｌｄｅｒ　Ｋ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａ　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｉｍ—　［２４］马丰英，姚睿玉，邹浩勇，等．猪支原体肺炎亚单位疫苗的免　ｐａｃｔ　ｏｆ　Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ａｖｅｒａｇｅ　疫应答［Ｊ］．中国兽医学报，２０１２，３２（４）：５２９—５３３．　Ｄａｉｌｙ　Ｇａｉｎ　ｉｎ　Ｓｗｉｎｅ［Ｊ］．Ａｎｉｍａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｒｅｐｏ￣，２０１２，６５８（１）：４．　（编辑：姜雪）　床试验ｆＪ１＿畜牧与兽医，２００９，４１（８）：９３—９５．