东北产香菇中多糖含量的提取及测定研究

东北产香菇中多糖含量的提取及测定研究

陈玉锋,庄志萍,胡志宏󰀁

(牡丹江师范学院化学化工学院,黑龙江牡丹江157012)

摘要󰀁[目的]研究香菇中多糖的提取方法,并对东北产香菇中多糖的含量进行测定。[方法]分别采取热水浸提法、微波辅助浸提法、超声辅助浸提法探讨了不同香菇多糖提取条件对多糖提取率的影响,确定了超声辅助浸提法为最佳提取方法,并用该方法提取香菇多糖,探讨硫酸-苯酚法测定多糖含量的最佳条件,测定东北产香菇的多糖含量。[结果]线性方程为y=7.4089c+0.0163,线性相关系数r=0.9987,精密度为RSD<2.00%(n=5)。[结论]超声辅助浸提法为香菇中多糖含量的最佳提取方法,该方法简便、快速、准确。关键词󰀁香菇多糖;提取;测定

+

中图分类号󰀁S646.12󰀁󰀁文献标识码󰀁A󰀁󰀁文章编号󰀁0517-6611(2010)26-14286-03StudyontheExtractionandDeterminationofLentinaninMushroomsCHENYu-fengetal󰀁(ColledgeofChemistryandChemicalEngineering,MudanjingNormalUniversity,Mudanjiang,Heilongjiang157012)Abstract󰀁[Objective]Theamiwastostudytheextractionofthelentinaninmushroomsanddeterminethecontentoflentinan.[Method]Theeffectionofdifferentextractionconditionsonextractionefficiencyoflentinaninmushroomsbyusinghotwater,microwave-assistedextrac-tionandultrasonic-assistedextractionmethord,andtrasonic-assistedextractionmethordwasthebestmethord.Thenlentinanwasextractedbytrasonic-assistedextractionmethord,andoptmiumconditionsofthedeterminationoflentinancontentwerestudiedbyphenol-sulfuricacidmethordtodeterminethelentinancontentofnortheastmushrooms.[Results]Thelinearequationwasy=7.4089c+0.0163,andthelinearcoefficientwas0.9987,theprecisionwasRSD<2.00%(n=5).[Conclusion]Trasonic-assistedextractionmethordwasprovedtobesmiple,rapid,accurateandthebestextractionmethod.Keywords󰀁Lentinan;Extraction;Determination

󰀁󰀁香菇多糖是药理药效研究得较透彻的一种多糖,具有非常明显的药效和较明确的药理。香菇多糖的提取方法主要有热水浸提法、酸浸提法、碱浸提法、微波法、复合酶解法[1-6]等,笔者分别采取热水浸提法、微波辅助浸提法、超声辅助浸提法探讨了不同香菇多糖提取条件对多糖提取率的影响,确定了超声辅助浸提法为最佳提取方法,并用该方法提取了香菇中的多糖,探讨了硫酸-苯酚法测定多糖含量的最佳条件,测定了东北产香菇中的多糖含量1󰀁材料与方法1.1󰀁材料

1.1.1󰀁供试材料。香菇,产地:黑龙江省牡丹江市。1.1.2󰀁试剂与仪器。浓硫酸(AR,湖南株洲石英化玻有限责任公司)、苯酚(AR,广东汕头西陇化工厂)、葡萄糖(AR,中国国药上海试剂公司)、超级恒温水浴SYC-15B(南京桑力电子设备厂)、电热鼓风干燥箱101-3(山东省菏泽市南域益发仪器厂)、超声波清洗器KQ-100E(昆山市超声仪器有限公司)、FA1004型电子天平(上海越平科学仪器有限公司)、U-3010紫外可见分光光度计(日本日立公司)、微波炉(青岛澳柯玛有限公司)。

1.2󰀁方法󰀁将香菇于80󰀁温度干燥后,用研钵磨成一定程度的粉末,制成香菇粉。1.2.1󰀁热水浸提法单因素变化试验。称取2g干燥粉碎后的香菇粉,加入一定比例的蒸馏水提取香菇多糖,改变提取条件,用不同提取时间进行单因素变化试验,以确定提取因素变化范围以及各因素的最佳值,恒温水浴,间隙搅拌,提取液过滤,收集滤液。1.2.2󰀁微波辅助浸提法单因素变化试验。称取2g香菇粗

基金项目󰀁牡丹江师范学院指导项目(KZ2008008);牡丹江师范学院重

点项目(Z2008003)。

作者简介󰀁陈玉锋(1980-),男,山东单县人,讲师,硕士,从事天然产

物分析研究。

收稿日期󰀁2010-05-18[9]

[7-8]

粉于锥形瓶中,加入一定比例蒸馏水,浸泡10min后,放入微波炉中,微波辐射提取一定时间,将提取液过滤,采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,计算多糖提取率。通过单因素变化试

验考察微波辐射时间对多糖得率的影响。在单因素变化试验基础上分析确定微波提取最佳工艺条件。

1.2.3󰀁超声辅助浸提法。称取2g香菇粗粉于锥形瓶中,加入一定比例的蒸馏水,选择一定频率的超声波,超声一段时间后,再按照常规热水浸提方法进行提取,减压抽滤得滤液。1.2.4󰀁多糖的测定。精确移取含一定量多糖的试液于25ml容量瓶中,加入1.5ml苯酚,摇匀,然后准确加入5ml浓硫酸,定容摇匀,显色60min后,在494nm波长下测定吸光度。2󰀁结果与分析2.1󰀁不同提取方法对多糖提取率的影响

2.1.1󰀁热水提取时间对多糖提取率的影响。试验数据如图1所示。从图中可以看出,随着提取时间的延长,提取率不断增加,当提取时间超过4h时,多糖提取率增加缓慢。

[9]

[9]

。

图1󰀁提取时间与多糖提取率的关系

Fig.1󰀁Relationshipofextractingtimeandpolysaccharideex-tractingratio

2.1.2󰀁微波提取时间对多糖提取率的影响。改变微波提取时间,考察提取时间对多糖提取率的影响,结果如图2所示。从图中可以看出,多糖提取率随提取时间的延长而增加,但当时间增大到6min后,多糖提取率反而略有下降。38卷26期󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁陈玉锋等󰀁东北产香菇中多糖含量的提取及测定研究

14287

这是因为提取时间越长,溶液温度越高,多糖分子有可能在高温下发生降解或结构遭到破坏的缘故,因此微波提取时间不宜太长。

图4󰀁紫外谱图

Fig.4󰀁Ultravioletspectrogram

图2󰀁微波辐射时间对多糖提取率的影响

Fig.2󰀁Relationshipofmicrowaveextractiontimeandpolysac-charideextractingratio

2.1.3󰀁超声时间与香菇多糖提取得率的关系。采用超声波

清洗器作为超声波发生器考察超声时间对香菇多糖提取率的影响,结果如图3所示。

图5󰀁显色时间与吸光度的影响

Fig.5󰀁Effectofdevelopingtimeonabsorbance

图3󰀁超声时间对多糖提取率的影响

Fig.3󰀁Relationshipofultrasonicassistedextractiontimeand

polysaccharideextractingratio

󰀁󰀁从图中可以看出,超声时间对多糖提取率有较大影响,

随着超声时间的增大,多糖提取率也增大,当超声时间增大到30min后,提取率增加缓慢,因此选择超声时间为30min。比较图1~3可以看出,3种提取方法中超声辅助浸提法的提取率最大,为0.06%~0.09%,因此,以下试验均采用此法提取多糖。

2.2󰀁多糖含量的测定

2.2.1󰀁最佳吸收波长。取浓度为1.6󰀁10mg/ml的标准液,按照󰀁1.2.4󰀁方法测定,结果如图4所示,可知葡萄糖最佳吸光波长为494nm。

2.2.2󰀁显色时间对多糖含量的影响。在室温条件下考察了显色时间对结果的影响,多糖含量测定按照󰀁1.2.4󰀁方法,结果如图5所示。从图中可以看出,显色时间为20~60min时,吸光度逐渐上升,60min后,吸光度开始下降,因此选择60min为最佳显色时间。2.2.3󰀁苯酚加入量对多糖含量的影响。在室温下考察苯酚加入量对结果的影响,多糖含量测定按照󰀁1.2.4󰀁方法,结果如图6所示。从图6可以看出,最佳加入苯酚量为1.55ml。2.2.4󰀁浓硫酸加入量对多糖含量的影响。在室温下考察浓硫酸加入量对结果的影响,多糖含量测定按照󰀁1.2.4󰀁方法,结果如图7所示。从图可以看出,加入硫酸量最佳为5m。l-3

图6󰀁苯酚对吸光度的影响

Fig.6󰀁Effectofphenolvolumeonabsorbance

图7󰀁硫酸用量对吸光度的影响

Fig.7󰀁Effectofsulphuricacidvolumeonabsorbance

2.2.5󰀁葡萄糖标准曲线。采用快速将浓硫酸加到溶液表面

的方式,以葡萄糖作为对照品,按苯酚-硫酸法测定工作曲线,结果如图8所示。标准曲线的线性回归方程为y=7.4089c+0.0163,相关系数r=0.9987,表明葡萄糖浓度在0.02~0.14mg/ml范围内与吸光度呈现良好的线性关系。2.3󰀁精密度测定实验󰀁取3份不同浓度的香菇多糖提取液,按校正的苯酚-硫酸法测定吸光度A,结果如表1所示。

14288󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁安徽农业科学󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁󰀁2010年

因素变化法确定了最佳提取条件:超声波预处理30min,香菇多糖提取率为8.9312%,相对其他方法较高。

表2󰀁回收率试验Table2󰀁Recoveryexperiment

样品测定量󰀁mgSampledeter-minedamount0.5

加标量󰀁mg

Addedamount

0.250.500.751.00

图8󰀁标准曲线Fig.8󰀁Standardcurve

2.505.508.5011.5014.50

加标测定量󰀁mg

Addeddetermined

amount

0.700.881.161.422.865.478.6510.6813.25

回收率󰀁%

Recoveryrate

80.076.088.092.094.490.495.988.587.9

结果显示5次测定结果变化很小,相对标准偏差RSD<2.00%(n=5),表明精密度高,重现性好。

表1󰀁精密度实验结果

Table1󰀁Precisionexperimentresults

样品号

SampleNo.123

平均测定结果(A)Averagedeterminationresults0.7230.5370.315

0.713

0.5450.343

0.743

0.5280.340

0.663

0.5500.335

0.643

0.5300.351

均值

Mean0.6950.5390.337

参考文献

RSD󰀁%

0.20

0.320.14

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2.4󰀁回收率测定󰀁分别移取1.0mg/ml的提取液0.5ml于9个25ml容量瓶中,再分别加入不同浓度的葡萄糖标准溶

液,按󰀁1.2.4󰀁方法测定多糖含量,计算加标回收率,结果如表2所示。表2显示一次测定加标回收率在76.0%~95.9%范围内,表明测定多糖含量准确可靠。3󰀁结论

采用超声辅助浸提法提取了香菇多糖,并采用硫酸󰀁苯酚法测定了香菇多糖的含量。采用超声辅助提取多糖能在相对较低温度下、较短提取时间内得到较高提取率,通过单

(上接第14283页)

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