细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

简介：

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm。阻断滤光片波长512nm。Leagene细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)，适用于培养细胞的自噬染色，又称为MDC染色液，可与EB合用双染。

组成：

编号 名称 DA0041 Storage 试剂(A): MDC Stain 试剂(B): 10×Wash buffer 试剂(C): Collection buffer 使用说明书 1ml 20ml 10ml -20℃ 避光 4℃ 4℃ 1份

操作步骤(仅供参考)：

(一)、MDC单独染色：

1、 用去离子水稀释1×Wash buffer至1×。

2、 离心，收集细胞，用1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。

3、 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。 4、 取适量细胞悬液至新的EP管中，加入MDC Stain，轻轻混匀。 5、 室温避光染色。

6、 离心收集细胞，用1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。 7、 加入Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。

8、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。 (二)、与EB双染色：

1、 用去离子水稀释1×Wash buffer至1×。

2、 离心收集细胞，用1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。

3、 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。

4、 取适量细胞悬液至新的EP管中，分别加入MDC Stain和 EB染色液，轻轻混匀。 5、 滴加于在玻片上，室温避光染色，加盖玻片。

北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com

6、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。

染色结果： 正常细胞 凋亡细胞 细胞被均匀染成黄绿色荧光 染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒

注意事项：

1、 MDC Stain和EB，试剂有一定毒性，请小心操作。

2、 吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。 3、 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。 4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。