一种复方过氧化氢医用器械消毒液的相关性能实验观察
2023-11-03
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中国消毒学杂志2015年第32卷第4期 ・3l1・ 【论著】 一种复方过氧化氢医用器械消毒液 的相关性能实验观察 梁金平,胡志锋 ,梁琼 (九江市庐山区疾病预防控制中心,江西九江332005; 1九江职业技术学院; 2九江市第一人民医院) 摘要 目的研究复方过氧化氢消毒剂消毒相关性能,为消毒应用提供依据。方法采用悬液定量和载体定量试 验法及理化检验法,对一种复方过氧化氢消毒剂的杀菌效果及理化性能进行了观察。结果 以含过氧化氢 57.80 g/L的该复方消毒液作用0.5 min,对悬液内金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的杀灭对数值>5.O0;作用lO min,对悬液内枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭对数值>5.O0。以该复方过氧化氢消毒剂作用5 min,对载体上枯草杆 菌黑色变种芽孢杀灭对数值>3.O0;作用20 min,对止血钳齿端上枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭对数值为5.23,作用 60 min可达到完全杀灭。将该复方消毒剂原液密封保存在37℃90 d,过氧化氢含量平均下降率为6.52%。该复方 过氧化氢消毒液对不锈钢、碳钢和铜等金属均基本无腐蚀。结论该复方过氧化氢医用器械消毒液性能稳定,对 细菌繁殖体、酵母菌和细菌芽孢均具有优良的杀菌效果。 关键词过氧化氢;复方消毒剂;枯草杆菌黑色变种芽孢;杀菌效果;稳定性 中图分类号:R187.1 文献标识码:A 文章编号:1001—7658(2015)04—0311—04 Observation on the properties of a compound hydrogen peroxide disinfectant for medical equipment lLANG Jin—ping,Hu Zhi—feng ,LIANG Qiong (Jiujiang Lushan District Center for Disease Prevention and Control,Jiujiang Jiangxi 332005; 1 Jiujiang Vocational and Technicla College; 2 Jiujiang First People’S Hospital,China) Abstract Objective To study the disinfection—related properties of a compound hydrogen peroxide disifnectant,SO as to provide basis for disinfection applieation.Methods Using suspension quantitative and carrier quantitative test method and the physical and chemical inspection,we observed germicidal efifcacy and related properties of the compound hydrogen peroxide disinfectant.Results Using the compound disinfectant contained 57.8o g/L compound hydrogen peroxide,the killing logarithm values of Staphylococcus aureus and Candida albicans in suspension within 5 minutes were greater than 5.00.while for 10 minutes the killing logarihtm values of Bacillus subtilis var.niger spore were greater than 5.00.U. sing tlle compound disifnectant within 5 minutes.the killing logarithm values of Bacillus subtilis var spore on tlle stained carrier was greater than 3.00 and within 20 minutes the killing logarihtm values of Bacillus subtilis uar spore on tlle stained hemostatic forceps tooth end was greater than 5.23;within 60 minutes,spores on the stained hemostatic forceps tooth end could be completely killed.After the compound disinfectant sealed at 37 oC for 90d,the average content of hydrogen perox— ide declined 6.52%.The compound hydrogen peroxide disinfectant had no corrosion on stainless steel,carbon steel,copper etc.Conclusion.nle performance of the compound hydrogen peroxide disinfectant for medical instrument is stable.It has excellent germicidal efifcacy on vegetative forms of bactera,yeast and bacterila spores. Key words hydrogen peroxide;compound disinfectartt;Bacillsu subtilis var spore;germicidal efifcacy;stability 过氧化氢作为消毒剂已有较长的应用历史,但 曾报道过一种新型复方过氧化氢消毒剂杀菌效果的 因其所用杀菌浓度高,腐蚀性强,低浓度稳定性能 研究结果,但当时未能较好地解决其稳定性和对金 差,不适宜用于医疗器械的消毒与灭菌。本文作者 属的腐蚀性的问题,使推广应用受到限制…。本研 究对原配方进行了调节,基本满足了医疗器械消毒 [作者简介]梁金平(1955一),男,江西修水人,大专,副主任技师, 从事微生物检验工作。 与灭菌的相关技术要求。为观察该复方过氧化氢医 疗器械消毒液的消毒相关性能,进行了实验室和现 场试验观察。现将试验结果报告如下。 1方法 1.1材料 实验用该复方消毒液主要杀菌成分为过氧化 氢,原液过氧化氢含量为57.80 g/L,辅以增效、稳定 和缓蚀性能的多种组分,经复配成复方过氧化氢医 疗器械消毒剂。该复方消毒剂为无色或略显淡黄色 透明液体,无刺激性气味,pH2.8。 试验指标菌有金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、 白色念珠菌(ATCC 10231)和枯草杆菌黑色变种 (ATCC 9372)芽孢,购白军事医学科学院消毒检测 中心。 1.2杀菌试验 1.2.1 菌悬液及染菌载体的制备取经分离培养 的单个典型菌落接种普通营养琼脂培养基斜面(白 色念珠菌用沙堡琼脂钭面),培养后用其新鲜斜面 培养物。用1 000 mg/L胰蛋白胨生理盐水(TPS)洗 下斜面上菌苔并稀释制成试验菌悬液。细菌芽孢制 备参照2002年版《消毒技术规范》规定的方法,将 枯草杆菌黑色变种经过分纯培养成营养肉汤培养 物,接种罗氏瓶。培养成芽孢后,经专门细菌芽孢制 备过程,制备成含菌量l X 10 一5 X 10 cfu/ml芽孢 悬液;用于染菌载体制备的芽孢悬液内,加人体积分 数10%小牛血清,取l0 l芽孢悬液滴染于10mm× 10mm的灭菌不锈钢载体上,晾干备用;模拟现场试 验在止血钳齿端上滴染20 L芽孢悬液,晾干备用。 1.2.2 中和剂鉴定试验悬液法试验菌为金黄色 葡萄球菌、白色念珠菌和枯草杆菌黑色变种芽孢;载 体法试验只用枯草杆菌黑色变种芽孢。试验设计6 组,分别按规定操作步骤进行试验。试验结果,当第 1组无菌生长或仅有极少数试验菌生长;第2组有 较第1组为多,但较第3、4、5组为少的菌落生长;第 3、4、5组组问菌落数误差率<15%时,可判定所选 中和剂及其浓度适宜 J。 1.2.3悬液定量杀菌试验实验在20 ̄C水浴条件 下进行,首先将所有试验液体经过恒温5 min。在无 菌试管中加入0.5 m1菌悬液与0.5 ml含30 L牛 血清白蛋白溶液,再加入4.00 ml消毒液(阳性对照 为TPS),并充分混匀。作用至规定时间,取菌药混 合液0.5 rnl于4.5 rnl中和剂试管中,混匀。中和作 用10 min,振荡混匀取样液接种培养,进行活菌计 数,计算杀灭对数值。所有试验重复3次。 1.2.4 载体定量和定性杀菌试验 按每菌片 5.0 ml的用量,加入复方过氧化氢消毒液原液于无 Chinese Journal of Disinfection 2015;32(4) 菌平皿中(阳性对照为TPS),置20℃水浴中恒温 10 min,加入染菌片。作用到预定时间后,取出菌 片,投入加有5.0 ml中和剂的试管中作用10 min。 经充分振荡洗脱后,取洗脱液于无菌平皿,倾注TSA 琼脂混匀,凝固后培养进行活菌计数,计算杀灭对数 值。试验重复5次。 定性试验时,经相同试验程序操作之后,把菌片 投入5.0 ml含中和剂的胰蛋白胨大豆肉汤(TSB) 中,同时接种阳性对照管,均于37℃培养连续观察 7 d无菌生长即可判定结果。重复试验5次。 1.2.5 医疗器械模拟现场的消毒和灭菌试验按 每把染菌止血钳10.0 ml的用量,加入复方过氧化 氢消毒液原液于无菌平皿中共计50.0 ml,置20℃ 水浴中恒温10 min。将5个染菌载体浸泡于消毒液 内作用到预定时间后,取出分别放于10.0 ml含中 和剂的无菌试管中作用10 min,经充分振荡洗脱后, 取洗脱液于无菌平皿,倾注TSA琼脂进行活菌计 数,计算杀灭对数值。试验重复3次,每次2O份。 模拟现场灭菌试验时,经相同试验程序操作之 后,把染菌载体投入10.0 ml含中和剂的胰蛋白胨 大豆肉汤(TSB)中,同时接种阳性(为标准硬水)和 阴性对照管,37o【=培养7 d观察结果。 1.2.6连续使用稳定性试验将复方过氧化氢消 毒剂原液2 000 ml置于不锈钢带盖方盘中,一式2 份,放人止血钳、持针钳、镊子等手术医疗器械,并使 其达到满载要求。每天将器械取出用水冲洗、沥干、 再放人消毒液中,如此反复进行连续二周。二周后, 取消毒液进行悬液定量杀菌试验和医疗器械模拟现 场的消毒与灭菌试验,观察复方消毒液经连续使用 试验后,对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果。 1.3理化性能测定 1.3.1腐蚀性试验取直径24.0 mm、厚1.0 mm、 中心孔直径2.0 mm的不锈钢、碳钢、铜、铝等金属 圆片各3块,经去油、洗净、去氧化层,再洗净,脱脂 处理后,置50℃干燥1 h,取出后称重。取1.0 L的 棕色玻璃瓶4个,各加入过氧化氢含量为57.80 g/L 的复方消毒剂原液600 ml,将上述4种金属圆片悬 挂浸于其中,置于25℃恒温箱中,浸泡72 h后取出, 洗净、干燥水分后,再置50 ̄C干燥1 h,取出恒重后 再次称重,计算金属腐蚀速率(R)。 1.3.2稳定性试验将该复方消毒剂原液装于聚 乙烯瓶中,一式3份,密封后分别存放54 ̄C 14 d、 37℃90 d和自然室温1年。于存放前、后用高锰酸 滴定法测定过氧化氢含量,每批测定3个样品,每个 样品平行测定2次,计算过氧化氢平均下降率。同 时,用经稳定性存放期后的各批次消毒剂,采用悬液 中国消毒学杂志2015年第32卷第4期 定量法进行杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢的试验,观 察经各存放期后杀菌效果的变化情况。 2结果 、 2.1 中和剂鉴定结果 结果表明,以含63 L硫代硫酸钠、5 L卵磷 脂、50 g/L吐温一80的磷酸盐缓冲液作为中和剂, 可有效中和悬液试验中消毒剂的残余作用。以含 15 g/L硫代硫酸钠、5 g/L卵磷脂、50 g/L吐温一80 的磷酸盐缓冲液可有效中和载体杀菌试验中消毒剂 的残余作用。 2.2杀菌试验结果 2.2.1悬液定量杀菌试验结果用含过氧化氢为 57.8 g/L的复方消毒液,对悬液内金黄色葡萄球 菌、白色念珠菌作用0.5 min平均杀灭对数值均 >5.00;对悬液内枯草杆菌黑色变种芽孢作用 10 min,平均杀灭对数值>5.00(表1)。 表1 复方过氧化氢消毒液悬液定量杀菌试验结果 在相同实验条件下,用含过氧化氢为58.50 g/L 的单方过氧化氢消毒液作用30 min,对悬液内金黄 色葡萄球菌的平均杀灭对数值>5.o0;作用60 min, 对悬液内白色念珠菌的平均杀灭对数值>4.00;作 用150 min,对悬液内枯草杆菌黑色变种芽孢平均杀 灭对数值为>5.00(表2)。 表2单方过氧化氢消毒液悬液定量杀菌试验结果 2.2.2载体定量和定性杀菌试验结果用含过氧 化氢57.80 L的复方消毒液作用5 min,对载体上 的枯草杆菌黑色变种芽孢的平均杀灭对数值为 4.32;作用10 min,可达到完全杀灭。相同浓度的单 方过氧化氢消毒剂作用120 min,对载体上该细菌芽 孢杀灭对数值为5.08(表3)。 表3过氧化氢消毒剂载体定量法杀芽孢效果 不同作用时间(min)的杀灭对数值 消毒剂组别—— 复方过氧化氢 4.32 6.69 6.69 6.69 90 1加 150 180 单方过氧化氢 3.85 5.O8 6.69 6.69 注:阳性对照组菌数对数值6.58~6.88。 载体定性杀菌试验结果表明,用含过氧化氢 57.80 g/L的复方消毒液作用10 min,可完全杀灭染 于载体上的枯草杆菌黑色变种芽孢,37℃培养7 d 观察,均无菌生长。 2.2.3 医疗器械模拟现场消毒和灭菌试验结果 用含过氧化氢57.80 g/L的复方消毒液作用 20 min,对止血钳齿端上的枯草杆菌黑色变种芽孢 杀灭对数值为5.23;作用60 min,可达到完全杀灭; 60份染菌止血钳投入TSB肉汤中,培养7 d后观察 均无菌生长;阳性对照管培养全部阳性。阳性对照 平均回收菌量为4.8×10 ofu/把。 2.2.4 连续使用试验结果 用过氧化氢含量 57.80 g/L的复方消毒液,连续浸泡医疗器械2周, 取出浸泡液进行悬液定量杀菌试验和医疗器械模拟 现场消毒与灭菌试验。结果表明,其对悬液中枯草 杆菌黑色变种芽孢作用10 min,可达到完全杀灭;对 止血钳齿端上的枯草杆菌黑色.变,种芽孢作用 20 min,杀灭对数值为5.32,作用60 min,可达到完 全杀灭。其杀芽孢效果与连续使用试验前无明显差 异(表4)。 表4复方过氧化氢消毒液连续使用后杀灭芽孢的效果 不同作用时间(min)的杀灭对数值 组别—— 连续使用之前4.28 7.58 7.58 7.58 连续使用2周后4.12 7.58 7.58 7.58 注:阳性对照组菌数对数值7.45~7.69。 2.3理化试验结果 2.3.1腐蚀性试验结果 用含过氧化氢57.8 L 的消毒剂浸泡各种金属72 h,取出观察可见各金属 片表面光亮,无锈迹;浸泡液无色,清晰透明;分别取 各浸泡液测过氧化氢含量,其下降率均≤0.87%;对 金属腐蚀速率分别为不锈钢0.0000 mm/a、碳钢0. 0070 mm/a、铜0.0041 mm/a、铝0.1012 mm/a。按 腐蚀性分级标准判定,对不锈钢、碳钢、铜基本无腐 蚀,对铝有中度腐蚀。 2.3.2稳定性试验结果测定结果表明,本复方消 Chinese Journal of Disinfection 2015;32(4) 毒剂密封包装存放54'12 14 d、37 ̄12 90 d和自然室 均显现出载体法试验有效杀灭细菌芽孢的作用时 间,明显低于采用悬液法试验的作用时间。这一现 象的产生,可能与载体法染于载体上的菌不易完全 洗脱或在浸泡过程中向浸泡液中扩散,从而造成部 分残留菌的损失;另外,加于载体上的有机干扰物能 否起到较好的干扰作用,是否与加于悬液法中的有 机干扰物具有等同的干扰效果,这些不确定因素是 导致二种杀菌方法有效作用时间不相一致的原因。 温1年后,过氧化氢含量平均下降率依次分别为 2.44%、6.52%和5.64%。同时,用经各存放期的 复方消毒液进行悬液杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢试 验证实,其杀菌效果均未见下降(表5)。 表5复方过氧化氢消毒剂稳定性试验结果 悬液法的菌药混合物中有机干扰物和残留菌量均呈 较均匀的分布,各时间段取样误差相对较小,得出的 实验结果相对较稳定。因此,评价消毒剂的杀菌效 果,应以悬液法杀菌试验结果为准。 本复方消毒剂偏酸性,考虑到中和剂的pH缓 注:阳性对照组菌数对数值7.20~7.88。 冲能力有限,为了使载体定性杀菌试验中残留菌能 得以更好地复苏,根据不同载体加入一定量的无菌 3讨论 氢氧化钠调节酸度,实验结果证实,其对载体定性结 研究结果表明,本复方过氧化氢消毒剂,对金黄 果具有一定的影响;而对定量杀菌试验,因其要倾注 一色葡萄球菌、白色念珠菌和枯草杆菌黑色变种芽孢 定量的琼脂,使菌药原液得以稀释,其中和剂是否 加碱调节酸度,对实验结果无影响。 均具有优良的杀灭效果,与经调节酸度、过氧化氢含 量达到基本一致的单方过氧化氢比较,具有显著的 参考文献 增效作用;其杀菌效果明显优于国内同类研究报 [1]梁金平,洪倩,梁琼,等.一种新型过氧化氢复方消毒剂的杀 告口‘ ‘ 。实验结果证实,本复方消毒剂具有较好的 菌效果及相关性能的实验观察[J].中国消毒学杂志,2007,24 (4):247—350. 稳定性能,除对金属铝有中度腐蚀外,对不锈钢、碳 [2] 中华人民共和国卫生部.消毒技术规范[s].2002. 钢、铜均基本无腐蚀。经科学的复配技术配制的本 [3]沈伟,朱仁义.过氧乙酸与过氧化氢消毒剂及其研究进展 复方过氧化氢消毒剂,大幅度地提高了杀菌效果和 [J].中国消毒学杂志,2010,27(4):456-457. 稳定性能,有效地控制或降低了过氧化氢对金属的 [4]薛广波.公共场所消毒技术规范[1M].北京:中国标准出版 腐蚀性,使其各项消毒性能指标均能基本满足医疗 社,2010:5. [5]王冰妹,王雅静,陈惠珍,等.一种过氧化氢消毒剂的杀菌效 器械消毒与灭菌的相关技术要求。 果及金属腐蚀性试验观察[J].中国消毒学杂志,2013,30 用本复方消毒剂和单方过氧化氢消毒剂进行载 (12):1114—1115. 体定量和悬液定量杀芽孢试验时发现,二种消毒剂 (收稿日期:20l4—09—19) 【读者・作者・编者】 致作者 本刊录用的稿件,其复制权、发行权、汇编权、信息网络转播权为本刊所有,本刊有权将上述权利转授给 第三方。作者不得再许可他人以任何形式使用该文稿,但作者本人可以在其后继作品中引用(或翻译)该文 稿中部分内容或将其汇编在非期刊类文集中。为适应我国信息化建设需要,本刊已加人《中国学术期刊(光 盘版)》、“中国期刊网”全文数据库和《万方数据一数字化期刊群元数据》等,其著作权使用费与本刊稿费一 次性给付。为进一步提高期刊学术质量,缩短文稿出版周期,本刊对部分稿件实行数字优先出版(等同纸质 出版),自数字出版之日起,在中国知网(CNKI)全文数据库中可全文检索和下载优先出版稿件。 《中国消毒学杂志》编辑部