ATRA对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞CDK4、CyclinD1、Rb表达的影响

山东医药２０１１年第５ｌ卷第５２期　ＡＴＲＡ对甲状腺鳞癌细胞株ＳＷ５７９细胞　ＣＤＫ４、ＣｙｃｌｉｎＤ１、Ｒｂ表达的影响　张秀梅。刘超，闫纪亮，赵颂，王翠瑶。肖建英　（辽宁医学院，辽宁锦州１２１００１）　摘要：目的观察全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对甲状腺鳞癌细胞株ＳＷ５７９细胞ＣＤＫ４、ＣｙｃｌｉｎＤ１、Ｒｂ表达的影响，以　探讨其抑癌机制。方法分别以终浓度为１Ｏ～、１０～、５×１０～、１０　ｍｏｌｆＬ的ＡＴＲＡ作用ＳＷ５７９细胞株，对照组加　入５　ｌ无水乙醇，各组细胞均在培养２４　ｈ后加药。继续培养４８　ｈ，ＲＴ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测ＳＷ５７９细胞ＣＤＫ４、　ＣｙｃｌｉｎＤ１、Ｒｂ　ｍＲＮＡ及其蛋白的表达。结果ＡＴＲＡ作用后，ＲＴ—ＰＣＲ检测结果表明，经不同浓度ＡＴＲＡ处理的细胞　ＣＤＫ４、Ｒｂ　ｍＲＮＡ表达水平没有明显变化；ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达明显下调；Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测结果表明经不同浓度ＡＴＲＡ　处理的细胞ＣＤＫ４蛋白表达水平没有明显变化，ｐＲｂ蛋白的磷酸化水平明显下降，ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白表达水平明显下　降。结论ＡＴＲＡ在一定浓度范围内可能通过下调甲状腺鳞癌细胞株ＳＷ５７９细胞ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达及Ｒｂ蛋白的磷　酸化水平抑制细胞增殖。　关键词：全反式维甲酸；甲状腺肿瘤；ＳＷ５７９；ＣＤＫ４；ＣｙｃｌｉｎＤ１；ｐＲｂ　，　中图分类号：Ｒ７３６．１　文献标志码：Ａ　文章编号：１００２－２６６Ｘ（２０１１）５２－０００７－０３　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＡＴＲＡ　ｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＣＤＫ４，ＣｙｃｌｉｎＤ１，Ｒｂ　ｉｎ　ｔｈｙｒｏｉｄ　ｓｑｕａｍｏｕｓ　ｃｅｌＩ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌＩｉｎｅ　ＳＷ５７９　ＺＨＡＮＧ　Ｘｉｕ－ｍｅｉ，ＨＵ　Ｃｈａｏ，ＹＡＮ　Ｊｉ－ｌｉａｎｇ，ＺＨＡＯ　ｓ帆ｇ，ＷＡＮＧ　Ｃｕｉ—ｙａｏ．ＸＩＡＯ　Ｊｉａｎ—ｙｉｎｇ　（Ｌｉａｏｎｉｎｇ　Ｍｅｄｉａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｊｉｎｚｈｏｕ　１２１０００，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｍｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ａｌｌ－ｔｒａｎｓ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ（ＡＴＲＡ）ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤＫ４，ＣｙｃｌｉｎＤ１　ａｎｄ　Ｒｂ　ｇｅｎｅ　ｏｆ　ｔｈｙｒｏｉｄ　ｓｑｕａｍｏｕｓ　ｃｅｌｌ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ（ＳＷ５７９）ＳＯ　ａｓ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ＡＴＲＡ　ｇｒｏｕｐｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｔＩｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＡＴＲＡ　ｆ　ｉｆｎａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　１０＿。，ｌ０一，５　Ｘ　１０＿。。，１０＿。ｍｏＶＬ）．Ａｆｔｅｒ　２４　ｈｏｕｒｓ，５　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｌａｃｏｈｏｌ　ｎａｄ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆＡＴＲＡ　ｗｅｒｅ　ａｄｄｅｄ．Ａｆｔｅｒ　４８　ｈｏｕｒｓ，ＣＤＫ４，ＣｙｃｌｉｎＤ１　ａｎｄ　Ｒｂ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＲＴ·ＰＣＲ．ＣＤＫ４，ＣｙｃｌｉｎＤ１　ａｎｄ　ｐＲｂ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ａｆｔｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＡＴＲＡ．ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤＫ４　ａｎｄ　ｐＲｂ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ；ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣｙｃｌｉｎＤ１　ｗａｓ　ｄｅｓｃｒｅａｓｅｄ；ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｃｈａｎ—　ｇｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤＫ４　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｎｏｔ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ；ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣｙｃｌｉｎＤ１　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｄｅｓｃｒｅａｓｅｄ；ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｐＲｂ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｄｅｓｃｒｅａｓｅｄ．Ｃｏｎｄｕｓｉｏｎｓ　ＡＴＲＡ　Ｃａｎ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｙｒｏｉｄ　ｓｑｕｍａｏｕｓ　ｃｅｌｌ　ｃ￣ｃｉｎｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　ｉｎ　ａ　ｄｏｓｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ．Ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｍａｙ　ｂｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ　ｏｆ　ＣｙｃｌｉｎＤ１，ｐＲｂ　ｍＲＮＡ　ｎａｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｌｌ－ｔｒａｎｓ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ；ｔｈｙｒｏｉｄ　ｎｅｏｐｌａｓｍｓ；ＳＷ５７９；ＣＤＫ４；ＣｙｃｌｉｎＤ１；ｐＲｂ　目前研究表明，ＣｙｃｈｎＤ１、ＣＤＫ４表达异常及Ｒｂ蛋　们于２Ｏ０９年１０月一２０１０年８月进行本实验，用ＡＴＲＡ　白的磷酸化状态与多种恶性肿瘤的发生和发展有　处理甲状腺鳞癌细胞株ＳＷ５７９，应用ＲＴ－ＰＣＲ及Ｗｅｓｔ—　关¨］。我们以往的研究　表明，全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）　ｅｌＴｌ　ｂｌｏｔ方法检测加入ＡＴＲＡ前后细胞周期因子ｃｙ—　能够抑制ＳＷ５７９细胞生长，并将细胞阻滞于Ｇ。期；同　ｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４、ｐＲｂ表达的变化，以期进一步了解ＡＴＲＡ　时在ｍＲＮＡ水平上调Ｐ２１及ＲＡＲＩ３的表达。Ｐ２１及　抑制甲状腺鳞癌细胞增殖的分子机制。　ＲＡＲＩ３是否通过调控细胞周期相关蛋白ＣｙｃｌｉｎＤ１、　１材料与方法　ＣＤＫ４、Ｒｂ的表达水平从而阻滞细胞周期还不明确。我　１．１主要试剂．ＡＴＲＡ、Ｌ１５培养液、ＲＴ．ＰＣＲ试剂　盒（大连宝生物）、ＴＲＩｚｏｌ试剂（Ｇｉｂｃｏ　ＢＲＬ）、兔抗人　基金项目：辽宁省教育厅重点实验室项目（ＬＳ２０１０１０１）。　ＣｙｃｌｉｎＤ１、ＣＤＫ４、Ｒｂ磷酸化多克隆抗体均购自美国　｝通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｘｉａｏｊｉａｎｙｉｎｇ６８８６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ　Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ公司，辣根过氧化物酶偶联的ＩｇＧ购自北　７　山东医药２０１１年第５１卷第５２期　京中杉金桥生物技术有限公司，ＰＣＲ扩增仪（德国　含５％ＢＳＡ的ＴＢＳ（ｐＨ　７．４）将滤膜于室温摇动温育　Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司），Ｓｕｎｒｉｓｅ自动酶标检测仪（瑞士ＴＥ。　ＣＡＮ公司）。　２　ｈ进行封闭，封闭后的滤膜冉分别与ＣｙｃｌｉｎＤ１、　ＣＤＫ４、ｐＲｂ磷酸化抗体（稀释比为１：２００）４　温育　过夜。经ＴＦＢＳ洗涤后，辣根过氧化物酶偶联的ＩｇＧ　作为二抗（稀释比为１：５　０００）室温温育２　ｈ，洗膜后　使用ＥＣＬ发光法显色，内参采用３－ａｅｔｉｎ。扫描ｘ光　１．２细胞培养与观察　甲状腺鳞癌细胞株ＳＷ５７９　购自上海生命科学院细胞和生物化学研究所。培养　于Ｌ１５培养液中，饱和湿度、３７℃、无ＣＯ　的条件下　进行传代培养。当细胞处于对数生长期时以１Ｏ　个＂／ｍｌ浓度接种于２５　ｅｍ　的培养瓶，２４　ｈ后待细胞　贴壁后给药，使ＡＴＲＡ终浓度分别为１０～、１０～、５　片，计算机软件处理，进行密度分析，计算灰度值。　１．５统计学方法应用ＳＰＳＳ１３．０统计软件，各组　数据以　±ｓ表示，多样本均数检验采用方差分析，　以Ｐ≤０．０５为差异有统计学意义。　２　结果　×１０～、１０～ｍｏｌ／Ｌ，对照组加入５　ｌ无水乙醇［乙　醇浓度小于０．１％（Ｖ／Ｖ）］。　１．３半定量ＲＴ－ＰＣＲ检测ＣＤＫ４、ＣｙｅｌｉｎＤ１、Ｒｂ基因　ｍＲＮＡ的表达　采用ＴＲＩｚｏｌ一步法提取细胞总　２．１　ＡＴＲＡ对ＳＷ５７９细胞ＣＤＫ４、ＣｙｅｌｉｎＤ１、Ｒｂ基　因ｍＲＮＡ表达的影响　与空白对照组比较，ＡＴＲＡ　组在一定浓度（１０一　～１０。ｍｏｌ／Ｌ）范围内随着药物　浓度的增加，ＣｙｃｈｎＤ１　ｍＲＮＡ表达水平逐渐下降，且　呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５），但ＣＤＫ４、Ｒｂ　ｍＲＮＡ表达　水平没有明显变化，见表１、图１～３。　表１　ＣＤＫ４、ＣｙｃｌｉｎＤ１、Ｒｂ　ｍＲＮＡ的表达水平（Ｘ＋－．Ｓ，ｎ＝３）　组别　ＣＤＫ４／１３．－ａｃｔｉｎ　ＣｙｅｌｉｎＤ１／１３－ａｅｔｉｎ　Ｒｂ／［３－，ａｅｔｉｎ　ＲＮＡ。使用ＡＭＶ逆转录酶合成ｃＤＮＡ第１链，在　Ｔａｑ酶的作用下进行ＰＣＲ的扩增。ＣＤＫ４的循环条　件：９４℃２　ｍｉｎ、９４℃变性３０　Ｓ、５５℃３０　Ｓ、７２℃１　ｍｉｎ（３０个循环），７２　ｏＣ　５　ｍｉｎ；ＣｙｃｌｉｎＤ１的循环条　件：９４℃２　ｍｉｎ、９４℃变性３０　Ｓ、５８　ｃＣ　３０　Ｓ、７２　ｏＣ　１　ｍｉｎ（３０个循环），７２℃５　ｍｉｎ；Ｒｂ的循环条件：９４℃　２　ｍｉｎ、９４　ｏＣ变性３０　Ｓ、６０　ｏＣ　３０　Ｓ、７２℃１　ｍｉｎ（３０个　循环），７２　ｏＣ　５　ｍｉｎ；Ｂ—ａｃｔｉｎ的循环条件：９４　ｃｃ　２　ｍｉｎ、９４　ｑＣ变性３０　Ｓ、５５℃３０　Ｓ、７２　ｃｃ　１　ｍｉｎ（３０个循　环），７２℃５　ｍｉｎ。取ＰＣＲ产物１Ｏ　ｌ进行琼脂糖凝　胶电泳并拍照，应用凝胶图像分析管理系统进行灰　度测量，ｍＲＮＡ的表达水平以每一样品与其内参Ｂ．　ａｃｔｉｎ灰度比值表示。ＰＣＲ引物序列及扩增片段长度　如下：ＣＤＫ４上游引物５　．ＴＧＡＴＧＣＧＣＣＡ　ｑＧ哪ＥＴＡ．　ＡＧＡＧＧ一３　，下游引物：５　一ＧＧＴＣＧＧＣＴＴＣＡＧＡＧ＿ＴｒＩ’Ｃ．　ＣＡＣＡ－３　，扩增片段长度３０８　ｂｐ。ＣｙｃｌｉｎＤ１上游引物：　５　．ＧＡＡＡＧＴＡＧＧＧＡＣＣＴＣＡＧＡＧＧ．３　，下游弓ｌ物：５　．ＣＴ－．　图１各组细胞ＣＤＫ４　ｍＲＮＡ的表达水平　ＧＴｃｃＴｃｃｃＴｃＡｃＡｃＧＴｃＡ．３　，扩增片段长度５７７　ｂｐ。　Ｒｂ上游引物：５　．ＴＡＣＣＴＡＧＣＴＣＡＡＧＧＧＴＴＡＡＴ一３　，下　游引物：５　．ＴＡＧＣＣＡＴＡＴＣＣＡＣＡＴＧＡＡＴＧ．３　，扩增片段　长度３００　ｂｐ。Ｂ．ａｃｔｉｎ上游引物：５　．ＧＧＧＡＡＡＴＣＧＴ．　ＧＣＧＴＧＡＣＡＴ．３　，下游弓Ｉ物：５　．ＣＡＧＧＡＧＧＡＧＣＡＡＴ．　ＧＡＴＣＴＩ＇．．３，扩增片段长度３８４　ｂｐ。Ｂ．－ａｃｔｉｎ上游引　物：５＇－ＴＧＡＣＧＧＧＧＴＣＡＣＣＣＡＣＡＣＴＧＴＧＣＣＣＡＴＣＴＡ－３　，　下游引物：５　一ＣＴＡＧＡＡＧＣＡＴＩＴＧＣＧＧＴＧＧＡＣＧＡＴＧ－　图２各组细胞ＣｙｃｉｉｎＤ１　ｍＲＮＡ表达水平　ＧＡＧＧＧ．３　，扩增片段长度６６１　ｂｐ。　１．４　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测ＣＤＫ４、ＣｙｃｌｉｎＤ１、ｐＲｂ蛋白的　表达用蛋白裂解液提取对数生长期细胞总蛋白，　图３各组细胞Ｒｂ　ｍＲＮＡ表达水平　注（图１～３）：Ｍ为Ｍａｒｋｅｒ（１００　ｂｐ　ｌａｄｄｅｒ）；１为空白对照组；２为乙　醇对照组；３为１０一　ｍｏｌ／Ｌ　ＡＴＲＡ组；４为１０～ｍｏＬ／１　ＡＴＲＡ组；５为５×　１０一　ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ组；６为１０一　ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ组　采用ＢＣＡ蛋白测定试剂盒蛋白浓度。总蛋白一２Ｏ　ｑＣ或一８０℃保存备用。电泳前加入ＳＤＳ样品缓冲　液，１００　ｏＣ煮沸５　ｍｉｎ，离心后上样，１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　电泳分离，然后将蛋白转至硝酸纤维素膜上，之后用　８　山东医药２０１１年第５１卷第５２期　２．２　ＡＴＲＡ对ＳＷ５７９细胞ＣＤＫ４、ＣｙｃｌｉｎＤ１、ｐＲｂ蛋　调甲状腺鳞癌ＳＷ５７９细胞Ｒｂ蛋白的磷酸化水平，　与文献报道相一致。提示ＡＴＲＡ抑制Ｓｗ５７９细胞　Ｂ　白表达的影响　与对照组比较，ＡＴＲＡ组在一定浓　度（１０～～１０　ｍｏ￣Ｌ）范围内，随着药物浓度的增　加，ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白表达水平、Ｒｂ蛋白的磷酸化水平　一　肪肪　．　一量　研究证实ＡＴＲＡ抑制ＭＥＰＭ细胞增殖，下调Ｃｙ—　ｃｌｉｎＤ１、Ｒｂ蛋白的磷酸化水平，依赖于Ｐ２１的表达，　增殖与下调Ｒｂ蛋白的磷酸化水平有关。Ｙｕ等　逐渐下降，且呈剂量依赖性（Ｐ＜０．０５），但ＣＤＫ４蛋　白表达水平没有明显变化，见表２、图４。　表２　ＣＤＫ４、ＣｙｃｌｌｎＤｌ、ｐＲｂ蛋白的表达水平（ｉ±ｓ，ｎ＝３）　组别　ＣＤＫ４／１３．ａｃｔｉｎ　ＣｙｅｌｉｎＤ１／ｌ￣．ａｅｔｉｎ　ｐＰ，ｂ／￣一ａｃｔｉｎ　Ｃｙｃｌｉｎ　Ｄ１　３２ｋＤ　３３ｌｄ）　１０５ｋＤ　４２ｋＤ　ｌ　Ｚ　４　５　图４　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测细胞周期相关蛋白表达　注：１为对照组；２为１０一　ｍｏｌ／Ｌ　ＡＴＲＡ组；３为１０～ｍｏＬ／Ｌ　ＡＴ—　ＲＡ组；４为５×１０一　ｍｏｌ／Ｌ　ＡＴＲＡ组；５为１０一　ｍｏｌ／Ｌ　ＡＴＲＡ组　３讨论　本实验中，ＡＴＲＡ在ｍＲＮＡ和蛋白水平都下调　了ＳＷ５７９细胞ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达，并呈剂量依赖性，　该结果与文献报道＿３　相一致。提示ＡＴＲＡ抑制　ＳＷ５７９细胞增殖与其下调ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达有关。　Ｒｂ是一个抑癌基因，非磷酸化（或低磷酸化）　形式为活性型，能促进细胞分化，抑制细胞增殖。　Ｒｂ蛋白的磷酸化程度与细胞周期密切相关，Ｒｂ蛋　白通过结合或释放转录因子Ｅ２Ｆ来控制检测点进　而控制细胞周期。Ｅ２Ｆ是一类激活转录作用的活性　蛋白，控制着ｓ期的重要蛋白质（包括ＤＮＡ合成　酶）的合成。低磷酸化的Ｒｂ蛋白与Ｅ２Ｆ结合，使　Ｅ２Ｆ处于非活化状态，从而抑制相关蛋白质的合成，　抑制细胞分裂；高磷酸化的Ｒｂ蛋白释放Ｅ２Ｆ，促使　细胞进入细胞周期。有研究表明，ＡＴＲＡ能够降低　胃癌细胞株ＢＧＣ－８２３、ＳＧＣ＿７９０１、ＭＫＮ－４５　Ｒｂ蛋白　的磷酸化水平　Ｊ，在ＭＥＰＭ细胞中，ＡＴＲＡ能够下调　Ｒｂ蛋白的磷酸化水平，并降低ＣｙｃｌｉｎＤ１、Ｅ蛋白的　表达【　。本研究证实，ＡＴＲＡ在一定浓度范围内下　并需要维甲酸受体的参与，支持我们的结果＿２　Ｊ。　综合以往研究，我们认为ＡＴＲＡ抑制ＳＷ５７９细　胞增殖的机制可能是通过高表达的ＲＡＲＢ与Ｐ２１　启动子上的维甲酸反应元件结合，促进Ｐ２１的表达。　Ｐ２１下调了ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达，抑制ＣＤＫ４的活性，从　而使Ｒｂ蛋白的磷酸化水平降低，低磷酸化的Ｒｂ蛋　白与Ｅ２Ｆ结合，使Ｅ２Ｆ处于非活化状态，从而抑制　相关蛋白质的合成，抑制细胞分裂，将细胞阻滞于　Ｇ。期，从而抑制ＳＷ５７９细胞的增殖。这种抑制机　制是否也存在于其他甲状腺癌细胞中，本研究室还　在进一步研究中。　参考文献：　［１］付锦艳，潘晓琳，杨安强．细胞周期调控相关蛋白Ｃｙｃｌｉｎ　Ｄ１、　ＣＤＫ４和ｐＲｂ在新疆维吾尔族妇女宫颈癌中的表达及意义［Ｊ］．　肿瘤防治研究，２００９，３６（１１）：９６９－９７２．　［２］肖建英，李男，张秀梅，等．ＡＴＲＡ对甲状腺鳞癌细胞生长及　ＲＡＲＢ和ｐ２１ｍＲＮＡ表达的影响［Ｊ］．肿瘤防治研究，２０１０，３７　（７）：７５９－７６２．　［３］Ｃｈａｎｇ　Ｑ，Ｃｈｅｎ　Ｚ，Ｙｏｕ　Ｊ，ｅｔ　１ａ．Ａｌｌ—ｔｒａｉｌｓ－ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｒｒｅｓｔ　ｉｎ　ａ　ｈｕｍａｎ　ｍｅｄｕｌｌｏｂｌａｓｔｏｍａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｏｎ－　ｃｏｌ，２００７，８４（３）：２６３－２６７．　［４］Ｊｉａ　Ｘ，Ｌｉｕ　Ｂ，Ｓｈｉ　Ｘ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｅｎｚｏ（ａ）ｐｙｒｅｎｅ·ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ａｌｌ—ｔｒａｎｓ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｐａｒｔｌｙ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｃｙｃｌｉｎ　Ｄ１／Ｅ２Ｆ一１　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｅｍｂｒｙｏ　ｌｕｎｇ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ　Ｉｎｔ，２００６，３０（２）：１８３－１８９．　［５］Ｈｕａｎｇ　Ｍ，Ｌｉｕ　Ｗ，Ｌｉ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｏｄｉｕｍ　ｂｕｔｙｒａｔｅ　ｉｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ＡＴＲＡ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｍｔｉｏｒ＃ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＳＫＭ·　１［Ｊ］．Ｊ　Ｈｕａｚｈｏｎｇ　Ｕｎｉｖ　Ｓｃｉ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ　Ｍｅｄ　Ｓｃｉ，２００４，２４（４）：　３３４－３３７．　［６］Ｗｕ　Ｑ，Ｃｈｅｎ　Ｚ，Ｓｕ　Ｗ．Ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃｎａｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ａｌｌ—ｔｒａｎｓ　ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ａｒｒｅｓｔｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．　Ｃｈｉｎ　Ｍｅｄ　Ｊ（Ｅｎｇ１），２００１，１１４（９）：９５８－９６１．　［７］Ｙｕ　ＺＬ，Ｌｉｎ　ＪＸ，Ｘｉａｏ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｅｌｌ　ｃｙｃｌｅ　Ｏ１＂－　ｒｅｓｔ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ｐａｌａｔｌａ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　［Ｊ］．Ｗｅｉ　Ｓｈｅｎｇ　Ｙａｈ　Ｊｉｕ，２００５，３４（５）：５６６－５６９．　［８］Ｙｕ　Ｚ，ＬｉＷ，ＬｕＱ，ｅｔａ１．ｐ２１　ｉｓ　ｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒ　ａｔＲＡ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＭＥＰＭ　ｃｅｌｌｓ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｖｏｌｖｅｓ　ＲＡＲ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏ—　ｃｈｅｍ，２００８，１０４（６）：２１８５－２１９２．　（收稿１３期：２０１１－０４－０６）　９