玉米贮存过程中霉菌总数及霉菌毒素含量变化的研究

玉米贮存过程中霉菌总数及霉菌毒素含量变化的研究　龚国利，许重要，廖　玉　（陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西西安７１００２１）　摘要：试验模拟饲料玉米的仓储条件，比较不同贮存条件下玉米中霉菌总数、主要产毒菌的种类以及霉　菌毒素如黄曲霉毒素、赭曲霉毒素和呕吐毒素含量变化的情况。在模拟贮存温度为２０￣２℃．湿度为６５±５％、　７５￣５％、８５±５％的条件下，分别进行贮存。检测时间为０、５、１０、１７、２４、３１、３８　ｄ，利用国标通用方法检测　霉菌总数和霉菌毒素含量变化的情况。结果表明，主要产毒菌种类有串珠镰刀茵、黄曲霉、构巢曲霉、纯绿青　霉；其中串珠镰刀茵是优势茵，是导致玉米中霉菌总数和呕吐毒素迅速超标的主要原因。　关键词：玉米；霉菌；毒素；检测　中图分类号：￥５１３￣Ｒ３７９文献标识码ｔ　Ａ文章编号：１００１—００８４（２００９）０９－００３５－０３　］　】　霉菌是形成分枝菌丝的真菌的总称，大多属于　中温型微生物，最适宜生长温度一般为２Ｏ～３０℃，　有１５０多种，主要是曲霉菌属、青霉菌属、镰刀菌　属等，常见的产毒素霉菌主要有曲霉属　ｓ—　ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、青霉属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、镰孢菌属（Ｆｕｓａｒｉ—　ｍ繁殖产毒的最适温度为２５～３Ｏ℃，湿度达到７５％　时霉菌孢子才能萌发，在相对湿度为８０％～１００％　时可快速生长。其中能对玉米颗粒造成污染的霉菌　收稿日期：２００９—０６—０２　）和麦角菌属（Ｃｌａｙｉｃｅｐｓ）等【　】。　基金项目：陕西科技大学科研启动基金项目（ＢＪ０８—１７）　霉菌毒素对人类、动物和植物具有巨大的潜在　威胁。随着人类社会的发展和对自然资源的开发和　利用，霉菌毒素产生的危害性越来越大。当霉菌处　于低温、干燥或与其他霉菌竞争的环境时会产生霉　　作者简介：龚国利（１９７６一），男，内蒙古丰镇人，博士　讲师，研究方向为微生物检测技术。　‘　’　！　‘盟　銎　菌毒素。由于霉菌生长具有地域性，所以不同区域　’　其虽然不是血红蛋白的成分，但为血红蛋白的合成　和红细胞的成熟所必需；Ｃｕ在机体内可以调节一　些含铜酶，如超氧化物歧化酶和铜蓝蛋白等调节炎　症反应细胞和抗氧化能力。　【参考文献】　［Ｊ１．浙江海洋学院学报（自然科学版），２００２，２１（１）：１３—１６．　曹丹，周洪琪．不同添加剂对暗纹东方鲍生长和脾脏溶菌酶活　力的影响咖．饲料广角，２００２（３）：１７—１９．　赵海涛，张其中，赵海鹏，等．南方鲇幼鱼和成鱼血液指标的比　较阴．动物学杂志，２００６，４１（１）：９４—９９．　周玉，郭文杨，杨振国，等．欧洲鳗鲡血液某些生物化学指标的　测定【ＪＪ．动物学杂志，２００２，３７（１）：５０—５２．　杨桂文，安利国，王长法，等．鲤鱼皮肤黏液与血清中免疫球蛋　白的比较研究　动物学研究，１９９８，１９（６）：４８９—４９２．　李建武．生物化学实验原理和方法『Ｍ】．北京：北京大学，２０００．　杨桂文，安利国．鱼类黏液细胞研究进展［Ｊ］．水产学报，１　９９９，　２３（４）：４０１—４０５．　徐镜波，张淑月．鲤鱼血清谷丙转氨酶活性和活性抑制的测定　［ＪＪ．松辽学刊（自然科学版），１９９９（４）：４—８．　张桂兰．虹鳟鱼血液学指标的测定叨．鲑鳟渔业，１９９１，４（２）：　８０－８４．　罗毅平，袁伦强，曹振东，等．嘉陵江大鳍蠖和瓦式黄颡鱼血液　指标的研究叫．水生生物学报，２００５，２９（２）：１６１—１６６．　陈昌福，纪国良．草鱼的血清、体表和肠黏液中溶菌物质活性　及其特性『Ｊ１＿华中农业大学学报，１９９２，１１（３）：２７６—２７９．　陈家长，翟建宏，胡庚东．铬对鲤鱼非特异性免疫功能的影响　陈刚，周晖，张健东，等．军曹鱼血液指标及血细胞发生的观察　【ＪＪ．水生生物学报，２００５，２９（５）：５６４—５７０．　２００９年第９期饲料博监·技术版　３５　占优势的霉菌毒素种类也不同。一种霉菌可以产生　玉米标准存放时，要求为低湿的条件，根据资料得　多种霉菌毒素，而不同的霉菌可以产生同一种霉菌　知在湿度为６５％时玉米中大部分霉菌开始生长，但　毒素。产毒素菌并非在所有适于生长的温度条件下　生长很慢，湿度为６７％～７５％时饲料较易发霉，而湿　都能产生毒素。目前研究最多的霉菌毒素有：黄曲　度大于７５％时玉米迅速发霉，因此将模拟玉米贮存　霉毒素（Ａｆｌａｔｏｘｉｒ￣ｓ）、赭曲霉毒素Ａ（Ｏｃｈｒａｔｏｘｉｎ　Ａ）、　条件的湿度设为６５±５％、７５￣５％、８５￣５％。　脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏ１　ＤＯＮ）、玉米　１．２．２原料处理　赤霉烯酮（Ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ）等Ｉ３　。　将７２０　ｇ玉米样品分成２４份，分别装在培养　玉米是最容易生长霉菌和产生霉菌毒素的食品　皿内，置于设定条件下的霉菌培养箱中，使样品充　原料和重要的饲料原料，给畜禽饲喂产霉菌和霉菌　分暴露，培养基为高盐察氏培养基，定期进行检测。　毒素污染的饲料，畜禽产品也会被污染，人类食品　１．２．３霉菌总数的检测　安全将受到威胁。影响玉米霉变的因素主要有温　根据ＧＢ／Ｔ　１３０９２—２００６中饲料中霉菌总数的测　度、湿度和贮存时间，根据要求，玉米应存放在　定所用的检测方法。　３０℃以下、阴凉、干燥、通风处。本试验模拟饲　１．２．４产毒菌种类的检测　料玉米不同的贮存条件，比较不同贮存条件下玉米　菌落鉴定采用肉眼观察，霉菌生长形态对照　中霉菌总数及霉菌毒素含量的变化情况。　ＧＢ／Ｔ４７８９．１６—２００３中描述的霉菌菌落形态进行鉴　１材料与方法　定；菌丝技术鉴定根据ＧＢ／Ｔ４７８９．１６—２００３中常见　１．１试验材料　产毒菌的鉴定方法中的霉菌鉴定方法进行；毒素检　Ｏ　原料玉米颗粒由陕西省西安瑞华饲料厂提供。　测利用Ｂｅａｃｏｎ毒素检测试剂盒（美国Ｂｅａｃｏｎ分析　１．２试验方法　方法公司生产）进行玉米中毒素含量的检测。　１．２．１贮藏条件的模拟　２结果与分析　按饲料玉米存放标准，温度应低于３Ｏ℃，而一　２．１霉菌总数随贮存时间的变化情况　年四季中，１５～２５　这个温度范围持续时间较长，　不同贮存条件下，玉米中霉菌总数的检测结果　所以模拟玉米标准贮存条件的温度设为２０￣２　ｏＣ；而　见表１　表１玉米中的霉菌总数　ｃｆｕ．　注：“一”表不未检出；“＋”代表菌落数过多司不计。　由表１可知，相对湿度为６５￣５％，温度为２０＋　２　ｏＣ的条件下，在前１个月内霉菌总数没有超过允　许限量，在第３１天时霉菌总数迅速增加，达到　３．９ｘ１０　ｃｆｕ·ｇ～，超过了国家饲料卫生标准规定饲料　中霉菌总数的限量标准１．０ｘｌ０　ｃｆｕ·ｇ～，但增加速度　≥　宝　不及其他条件。在相对湿度为７５±５％、温度为２０±　２　ｏＣ的条件下，存放到第２４天霉菌总数达到５．５×　翘　１０　ｃｆｕ·ｇ～，也超过国家饲料卫生标准。而在相对湿　蝴　度为８５￣５％，温度为２０￣２　ｃｃ条件下，玉米存放　１７　ｄ，霉菌总数就增长为５．５ｘ１０　ｃｆｕ·ｇ～，超过国　０　５　１０　１５　２Ｏ　２５　３Ｏ　家饲料卫生标准的霉菌总数限量标准。　贮存时间（ｄ）　玉米中霉菌总数随贮存时间的变化趋势见图１。　图１　玉米中霉菌总数随贮存时间的变化情况　３６　饲料博览－技术版２００９年第９期　０加０　∞由图１可知，在中温中湿的条件下，存放到第　２４天的霉菌总数开始迅速增长，而在中温高湿条　件下存放１７　ｄ，开始迅速增长，但贮存２４　ｄ后在　中温中湿条件下玉米的霉菌总数增长速度比中温高　湿条件增长快。　２．２产毒菌种类的鉴定　玉米中产毒霉菌种类的分析结果见表２。由表　２可知，主要产毒菌菌属有曲霉属、青霉属和串珠　镰刀菌为主。镰刀菌属最适生长温度为２０℃。通　常谷物在采收前就已感染，在贮藏期间生长旺盛。　另外，绿青霉也较多，仅次于串珠镰刀菌。　表２产毒菌种类　贮存条件　产毒菌种类　２０℃６５％　串珠镰刀菌、黄曲霉、赭曲霉、纯绿青霉、杂色曲　霉，在贮存２４　ｄ后串珠镰刀菌是优势菌　２ｏ℃７５％　串珠镰刀菌、黄曲霉、赭曲霉、纯绿青霉、杂色曲　霉：　在贮存１０　ｄ后串珠镰刀菌是优势菌　２Ｏ屯８５％　串珠镰刀菌、黄曲霉、赭曲霉、纯绿青霉、杂色曲　霉，在贮存１０　ｄ后串珠镰刀菌是优势菌　２．３霉菌毒素含量的检测　玉米中霉菌毒素含量的检测结果见表３。　表３玉米中霉菌毒素含量　，　ｔＬｇ。ｘｇ‘　贮　种类　１７　ｄ　２４　ｄ　３１　ｄ　黄曲霉毒素　一　一　２７．８　２Ｏ　ｏＣ　６５％　赭曲霉毒素　一　一８２．９　呕吐毒素　一　一　７　５００　黄曲霉毒素　一　２３．０　—　２Ｏ　ｏＣ　７５％　赭嗌霉毒素　一　７５．１　一　呕吐毒素　一　７　５５７　一　黄曲霉毒素　２２．８　一　一　２Ｏ℃８５％　赭曲霉毒素　７４．２　一　一　呕吐毒素　７　５２８　一　一　注：“一”表示未进行检测。　国家饲料卫生标准规定饲料中霉菌总数不超过　１．０ｘｌ０　ｃｆｕ·ｇ～，黄曲霉毒素含量不超过３０　ｇ‘ｋｇ～，　赭曲霉毒素含量不超过１００　Ｉｘｇ·ｋｇ～，呕吐毒素含量　不超过１　ｇ·ｋｇ－　［９－　引。　由表３可知，在温度为２０￣２　，相对湿度为　６５￣５％的模拟贮存下玉米可贮存到第３　１天；在相　对湿度７５±５％贮存条件下玉米可贮存放到第２４　天；而在相对湿度８５±５％的条件下玉米可贮存到　第１７天；即霉菌总数超出国家标准时，黄曲霉毒　素和赭曲霉毒素都未超过国家限量标准，但呕吐毒　素严重超标。因此在后续研究中应重点控制呕吐毒　系产生菌的生长以延长同等湿度贮存条件下饲料玉　米的保藏时间。　３结论　不同贮存条件对玉米中霉菌花数和霉菌毒系含　量有不同的影响。饲料玉米保质期的长短与其贮存　环境的湿度和温度密切相关。要重视和加强粮食贮　藏研究，研究不同贮藏条件和不同储藏措施对饲料　霉菌的影响，研究现有防霉剂的合理使用技术，不　断探讨生物防霉新技术；此外，还要建立科学合理　的霉菌监测指标体系，建立ＨＡＣＣＰ体系并找到关　键控制点，使饲料粮食的防霉科学化、系统化、规　１　¨　】　２　］　３　］　４　】　５　】　范化。　【参考文献１　Ｋｉｓｈａｎ　Ｓ，Ｍｏｒ　Ｓ，Ｍａｎｏｒａｍａ，ｅｔ　ａ１．Ａｆｌａｔｏｘｉｎｓ　１５ｒｏｄｕｃｅｄ　ｆｒｏｍ　ａｓ－　ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｌａｖｕｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ａｎｉｍａｌ　ｆｅｅｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ　ｍｉｘｔｕｒｅ叨．　Ｉｎｄ　Ｊ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９９，６９（４）：２６６—２６７．　Ｍｈｉｔｌｏｗ　Ｌ　Ｗ，Ｈａｇｌｅｒ　Ｗ　Ｍ　Ｊｒ．Ｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓ　ｉｎ　ｆｅｅｄｓ［Ｎ］．Ｆｅｅｄ　ｓｔｕｆｆｓ，　２００２。７４（２８）：１７—１８．　Ｇｏｕｒａｍａ　Ｈ，Ｂｕｌｌｅｒｍａｎ　Ｌ　Ｂ．Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｗ　ａｎｄ　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｐ０ｒ＿　ａｓｉｔｉｃｕｓ：Ａｆｌａｔｏｘｉｇｅｎｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｏｆ　ｃｏｎｃｅｒｎ　ｉｎ　ｆｏｏｄｓ　ａｎｄ　ｆｅｅｄｓ：Ａ　ｒｅ—　ｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｊ　Ｆｏｏｄ　Ｐｒｏｔｅｃｔ，１９９５，５８（１２）：１　３９５—１　４０４．　刘勇，龚月生．饲料霉变的预防、控制及处理叨．饲料研究，２００５，　（５）：３２—３３．　李云格，孙振钢．猪饲料霉菌毒素的控制明．饲料研究，２００５，　（４）：３２—３５．　易中华，马秋刚，陈旭东，等．环保型饲料的研制与生产技术叨．　饲料研究，２００５。（２）：４ｏ＿４３．　Ｂａｔａ　Ａ，Ｌａｓｚｔｉｔｙ　Ｒ．Ｄｅｔｏｘｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｙｃｏｔｏｘｉｎ　ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ　ｆｏｏｄ　ａｎｄ　ｆｅｅｄ　ｂｙ　ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｎｍＩＪＪ．Ｔｒｅｎｄｓ　Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ　Ｔｅｃｈｎｏｌ，１９９９　（１０）：２２３—２２８．　王继彤，王有月，卢春香，等．饲料中霉菌和霉菌毒素的预防和　去除方法田．中国畜牧兽医，２００４，３１（１Ｏ）：１２—１３．　赵燕飞，汪以真．影响我国饲料安全的主要因素叨．黑龙江畜牧　兽医，２００３（８）：４－５．　吕明斌，陈刚，汪尧春，等．北方地区饲料原料霉菌毒素污染状　况叨．中国饲料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