SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳注意事项
发布网友
发布时间：2024-10-24 13:34
共1个回答
热心网友
时间：2024-11-04 14:55
SDS与蛋白质的结合是按照质量比进行的，即1.4g的SDS与每克蛋白质相配比。蛋白质的含量必须严格控制，不能超出规定范围，否则SDS的结合量就会不足，影响实验结果。
使用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的相对分子量时，必须同时制作标准曲线。然而，这一标准曲线不能直接应用于下一次实验。使用SDS-PAGE测定的分子量可能存在10%的误差，因此不能完全信任这个结果。
某些蛋白质是由亚基（例如血红蛋白）或两条以上肽链（如Q-胰凝乳蛋白酶）组成的。在巯基乙醇和SDS的作用下，这些蛋白质会分解成亚基或多条单肽链。因此，对于这一类蛋白质，SDS-聚内烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的相对分子量。
对于某些蛋白质（例如电荷异常或结构异常的蛋白质；带有较大辅基的蛋白质），不能使用该方法来测定相对分子量。如果实验中出现拖尾、染色带的背景不清晰等情况，这可能是由于SDS的不纯引起的问题。
扩展资料
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术首先在1967年由Shapir0建立，其原理：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N，N’一亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铰(AP)，N，N，N’，N’ 四甲基乙二胺(TEMED)作用下，聚合交联向成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。
